aqp9基因在水牛卵泡顆粒細胞中的表達及其與細胞凋亡的初步研究

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1、巧古學化Ｉ胃乂Ｐ９基因在水牛卵泡顆粒細胞中的表達Ｑ及其與細胞澗長的巧步研究屈春鳳爲、巧乂學二〇—五年六月分類號Ｓ８１４．８密級卻ＵＤＣ編號碩：ｔ學位論文ＡＱＰ９基因在水牛卵泡顆粒細胞中的表達及其與細胞稠ｔ的巧步研究屈春鳳學科專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導教師李湘萍研究員劉慶友研究員論文答辯日期２０－５－２６１５授予日期答辨委員會主庶盧克煥教授廣西大學學位論文原創(chuàng)性和使用授權聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導師的指導下獨立進行研究所

2、取得，論文不包含任何其他個的研究成果。除已特別加Ｗ標注和致謝的地方外人或集體已經發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大一學或其它單位的學位而使用過的材料。與我同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢獻均已在論文中作了明確說明。本人在導師指導下所完成的學位論文及相關的職務作品，知識產權歸，即；學校有屬廣西大學。本人授權廣西大學擁有學位論文的部分使用權權保存并向國家有關部口或機構送交學位論文的復印件和電子版，允許論文被查閱巧借閱，可Ｗ將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行

3、。、匯檢索和傳播，可采用影印、縮印或其它復制手段保存編學位論文本學位論文屬于：□保密，在年解密后適用授權。■５２１不保密。＂＂請在Ｗ上相應方框內打Ｖ）（沁論文作者簽名：日期；：日期指導教師簽名／＾抑作者聯(lián)系電話：電子郵箱：ＡＱＰ９基因在水牛卵泡顆粒細胞中的表達及其與細胞調ｔ的初步硏究摘要一水通道蛋白（Ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ，ＡＱＰｓ）是類位于原核和真核生物細胞膜上，、與水的運輸密切相關的特異膜通道蛋白。對小鼠及人的研究發(fā)現(xiàn)除水轉運功能外，部分ＡＱＰｓ參與卵泡形成和

4、發(fā)育，與顆粒細胞的調亡、卵泡閉鎖及雌性動物生育力密切相關，但對其作用機理尚不完全清晰。本研究克隆了水牛ＡＱＰ９基因的編碼區(qū)序列，分析其在水牛卵泡和早期胚胎發(fā)育過程中的表達規(guī)律ｉ，Ｕｌ及不同閉鎖程度卵泡顆粒細胞和體外成熟卵母細胞周圍卵丘細胞中的ＡＱＰ９與稠亡相關基因的表達水平；其次，通過過表達ＡＱＰ９基因及添加ＰＫＣ抑制劑Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ的方式探索了ＡＱＰ９基因表達與水牛顆粒細胞調亡的關系，及ＡＱＰ９基因在ＰＫＣ信號通路調控的顆粒細胞洞亡中的作用、提高水牛。研究可為深入了解水牛卵

5、泡閉鎖發(fā)生機制繁殖性能奠定基礎：。主要研究結果如下－首先，應用ＲＴＰＣＲ方法克隆得到水牛ＡＱＰ９基因８８８ｂｐ的編碼區(qū)序列，生物信息學預測其編碼２９５個氨基酸。多重序列比較顯示，水牛ＡＱＰ９９９％、９０％、９７％、８８％基因與牛、豬、綿羊和人相應序列相似性分別為；氨基酸序列同源性分別為９９％、８６％、９７％、８３％，系統(tǒng)進化樹分析結果顯。，示，ＡＱＰ９基因在物種進化過程中具有高度保守性蛋白質結構分析顯示水牛ＡＱＰ９蛋白含有１７個蘇氨酸（Ｔｈｒ），不含有信號狀，存在潛在的稱Ｉ酸化位點和水通

6、道蛋白特有的結構域ＰｆａｍＭＩＰ。其次，對ＡＱＰ９基因在水牛雌性生殖細胞中的表達規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)：ＡＱＰ９蛋白在水牛原始ＲＴ－ＰＣＲ、初級、次級和有腔卵泡顆粒細胞中均有表達。ｑ分析結果顯示，與ＧＶ期相比，ＡＱＰ９基因在體外成熟的Ｍｎ期卵母細胞中Ｋ０－４－的表達水平顯著升高．０５），細胞巧胎及桑椎胚中未檢測（／在２細胞、，到其表達囊化期有表達。在不同閉鎖程度水牛卵泡顆粒細胞中，隨著卵泡閉鎖程度加深，ＡＱＰ９及調亡相關基因Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ３和Ｆａｓ的表達呈上升趨勢，其中ＡＱＰ９基因的表達在早期

7、閉鎖卵泡中顯著升高（／？＜０．０５）。在不同體外成熟質量卵母細胞周圍卵丘細胞中的表達分析發(fā)現(xiàn)，與成熟質量好的卵母細胞卵丘細胞相比，ＡＱＰ９基因在成熟質量差的卵五細施中的表達顯著升高（Ｋ０．０１）；同時調亡相關基因Ｂａｘ、ｃａｓａｓｅ３和Ｆａｓ的表達也顯／ｐ著升高（／Ｋ０．０５）。最后，在探討水牛顆粒細胞調亡與ＡＱＰ９表達關系的研究發(fā)現(xiàn)：過表ＡＱＰ９基因的水牛顆粒細胞經無血清培養(yǎng)可顯著上ＡＱＰ９及調亡相關基因Ｂａｘ－＜０、ｃａｓｐａｓｅ３、Ｆａｓ的表達，顯著下調Ｂｃｌ２的表達（／７．０５）。在分

8、析ＰＫＣ抑制劑Ｓｔａｕｒｏｓｏｒｉｎｅ介導的水牛顆粒細胞調亡與ＡＱＰ９基因表達關系的實ｐ驗中發(fā)現(xiàn)，Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ處理的水牛顆粒細胞，其形態(tài)出現(xiàn)塌陷，細胞膜出現(xiàn)拉絲樣向周圍分散，胞質空泡增多，懸浮死亡細胞增多，流式分析結果顯示，ＳｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅＷ濃度依賴型促進顆粒細胞澗亡，且隨著