snail基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究

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1、授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?0123159HebeiMedicalUniversity碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位Snail基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究研究生：馬曉琳導(dǎo)師：龐義存教授專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)二級(jí)學(xué)院：第三醫(yī)院2015年3月河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師（或指導(dǎo)小組）的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公幵和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)

2、權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名師簽章級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：女年^月‘河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成杲，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名:目錄中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………5英文縮寫(xiě)…………………………………………………………………10研究論文Snail基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮-間

3、質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究前言…………………………………………………………………11材料與方法…………………………………………………………11結(jié)果…………………………………………………………………23附圖…………………………………………………………………25附表…………………………………………………………………28討論…………………………………………………………………30結(jié)論…………………………………………………………………33參考文獻(xiàn)……………………………………………………………34綜述Snail基因與婦科惡性腫瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究……………37致謝………

4、………………………………………………………………44個(gè)人簡(jiǎn)歷…………………………………………………………………45中文摘要Snail基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究摘要目的：絨毛膜癌(choriocarcinoma，CC)，簡(jiǎn)稱絨癌，是一種生長(zhǎng)迅速的高度惡性腫瘤，以血行播散、轉(zhuǎn)移早而廣泛且對(duì)化療敏感為主要特征。其發(fā)病機(jī)制至今仍尚不清楚。絨癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生及對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是造成患者死亡的主要因素。因此，如何抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移成為研究熱點(diǎn)。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)，是指在特

5、定的生理或病理情況下，具有極性的上皮表型細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞骨架重塑現(xiàn)象，侵襲及遷移能力增強(qiáng)，上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin的表達(dá)改變，轉(zhuǎn)化為具有活動(dòng)能力的間質(zhì)表型細(xì)胞的過(guò)程。越來(lái)越多的研究表明，EMT不僅是哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育及器官形成的基礎(chǔ)過(guò)程，還與多種上皮性惡性腫瘤的局部浸潤(rùn)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此，進(jìn)一步了解EMT分子調(diào)控機(jī)制及腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制，再通過(guò)各種技術(shù)干擾EMT的過(guò)程，有望為絨癌的治療提供新方向。Snail基因首先在果蠅中發(fā)現(xiàn)，隨后在多種脊椎動(dòng)物包括人類中相繼識(shí)別出Snail及其同源組織。Snail及

6、其同源組織屬于SNAIL家族，包括Snail、Slug、S1P1等。在對(duì)多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，Snail基因通過(guò)抑制E-cadherin表達(dá)及促使N-cadherin表達(dá)，誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲及轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。然而，Snail基因與絨癌細(xì)胞EMT的關(guān)系罕見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)絨癌JEG-3細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染Snail基因作為處理因素，觀察細(xì)胞形態(tài)、遷移能力及EMT分子標(biāo)記物的表達(dá)，旨在研究Snail基因在絨癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討，以期為絨癌的治療提供新思路及理論依據(jù)。方法：1培養(yǎng)人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞株；2實(shí)驗(yàn)分組：

7、①實(shí)驗(yàn)組，應(yīng)用Lipofectamine?2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-Snail質(zhì)粒；②陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒；③脂質(zhì)體對(duì)照組，轉(zhuǎn)染Lipofectamine?2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑；④空白對(duì)照組，無(wú)任何處理；1中文摘要3倒置相差顯微鏡：觀察各組JEG-3細(xì)胞形態(tài)的變化；4細(xì)胞劃痕試驗(yàn)：應(yīng)用劃痕試驗(yàn)評(píng)估各組JEG-3細(xì)胞的遷移能力；5Real-timeqPCR：檢測(cè)各組JEG-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后Snail-mRNA的表達(dá)水平；6Westernblotting：檢測(cè)各組JEG-3細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadh-erin、間質(zhì)細(xì)

8、胞標(biāo)記物N-cadherin的表達(dá)情況；7應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(??±s)表示，多組間均數(shù)比較