口蹄疫—水皰性口炎—豬水皰病聯(lián)合共檢基因芯片的構(gòu)建

《口蹄疫—水皰性口炎—豬水皰病聯(lián)合共檢基因芯片的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、Ｉ—ｒ、■；；，分類號Ｓ化２．巧９學(xué)號￥２０１２巧２７四川農(nóng)化大學(xué)碩ｄｔ學(xué)位論文口蹄疫－水瘤牲口炎－豬水瘡病聯(lián)合共檢基因怒片的構(gòu)建歐陽達(dá)指導(dǎo)教師文也田巧巧學(xué)科專業(yè)預(yù)防咎睽挙研巧方向畜禽傳染?。崳姡玻埃保的辏对拢崳姡茫欤幔螅螅簦猓澹玻叮担梗墸樱簦簦牐猓澹樱玻埃保睬桑玻罚崳姡椋妫椋悖幔椋铮睿牐危酰恚颍海牐樱牐福担酰洌澹睿危酰恚颍海牐樱椋悖瑁酰幔睿牐粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔欤牐眨睿椋觯澹颍螅椋簦崳姡模桑樱樱牛遥裕粒裕桑希危崳姡樱酰猓恚椋簦簦澹洌牐椋睿牐校幔颍簦椋幔欤牐疲酰欤妫椋欤欤恚澹睿簦牐铮妫牐簦瑁澹牐遥澹瘢酰椋颍澹恚澹睿簦牐妫铩福?/p>

2、ＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥ－－ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＦＭＤＶＶＳＶＳＶＤＶＭｉｃｒｏａｒｒａｙＢＤａＯｕａｎｙｙｇＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＸｉｎｔｉａｎＷｅｎ＇ＹａａｎＳｉｃｈｕａｎ６２５０１４Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ，，，Ｊｕｎｅ０１５，２論文獨(dú)倒性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料一。與我同工作的同

3、志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：旬月曰淡夢巧年＾／７關(guān)于論文使用授巧的聲明目Ｐ；本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，光許論文被查閥和借閱，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。論文不保密。□本論文保密。，在＿＿年解密后適用本授權(quán)＂＂（請?jiān)冢咨稀鮾?nèi)劃Ｖ）研究生簽名；哈於年店月＾曰卿導(dǎo)師簽名：戶年月日＾摘要曰蹄疫口口ｏｏｔ

4、－ａｎｄ－ｍｏｕ化化ｅａｓｅ、豬水瘡病和水瘡性炎分別是由蹄疫病毒（Ｆｖｉｎｊｓ，ＦＭＤＶ）、豬水瘡病病毒（Ｓｗｉｎｅｖｅｓｉｃｕｌａｒｄｉｓｅａ化ｖｉｒｕｓ，ＳＶＤＶ）和水瘡性口炎病毒‘（Ｖｅｓｉｃｕｒｌａｓｔｏｍａｔｒｔｉｓｖｉｍｓ，ＶＳＶ）弓胞的急，都可Ｗ感染豬性動物傳染病，且由于發(fā)?。崳娨唬瑥陌l(fā)病癥狀上鑒別難度較大癥狀相似，因此構(gòu)建種能同時(shí)鑒別診斷Ｈ種疾病和區(qū)分口蹄疫Ｈ種血清型的髙通量聯(lián)合檢測方法具有重要意義。本研究ＷＦＭＤＶＯ型、Ａ型、Ａｓｉａ１ＳＶＤＶ為研究對象型、ＶＳＶ和，建立了寡核巧酸基因芯片檢測體系。研究內(nèi)容如下；１．共檢基因蒼片的幫基因引

5、物和探針的構(gòu)建：參考ＧｅｎＢａｎｋ中已公布的基因組序列，根據(jù)基因芯片引物設(shè)計(jì)要求，選拝三種病毒的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，對引物和探針進(jìn)行了驗(yàn)證，構(gòu)建了基于口蹄疫病毒ＡＭＤ－的、０、Ａｓｉａｌ型ＶＰ１序列、ＶＳＶ的Ｌ基因和ＳＶＤＶＶＰ１序列的ｐ：Ｌ９Ｔ克隆質(zhì)粒并一測序整定。結(jié)果顯示Ｉ９５％Ｗ上。，克隆的郎基因與ＮＣＢ公布的序列致性均在２．共檢基因芯片的構(gòu)建和優(yōu)化設(shè)計(jì)了基因芯片矩陣和位置指控、雜交質(zhì)控及雜交質(zhì)控探針序列，并對Ｈ種病毒的探針進(jìn)行了篩選。對藍(lán)片點(diǎn)樣后的水化溫度與封巧條件、ＰＣＲ退火溫度和循環(huán)數(shù)、、。巧光基團(tuán)標(biāo)記引物的使用量雜交濕度等進(jìn)行了優(yōu)化結(jié)果表

6、明：使用醒基基片，在’°１８Ｃ－３７Ｃ水化過０．２５％ＢＨＮａ２５％己醇的封閉私使用含４，液進(jìn)行封閉所制的芯片效‘果較好ＰＣＲ５８Ｃ一２３０，叫巧光基團(tuán)標(biāo)記引物；擴(kuò)增時(shí)選擇退火溫度般使用，擴(kuò)增個循環(huán)便可得到足夠的產(chǎn)物４－８；在臨床檢測時(shí)為提高靈敏度可使用叫巧光基團(tuán)標(biāo)記－引物－５０４２Ｃ，擴(kuò)増４０個循環(huán)，雜交溫度達(dá)到便可獲得有意義的結(jié)果，為保證特異性，在°Ｃ進(jìn)５２行雜交效果更好。３．共檢基因芯片的效果評價(jià)對所構(gòu)建的基因蒼片檢測方法進(jìn)行了靈敏性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)ＦＭＤＶ－０ＰＣＲ化１１８０ｎｍＬ。結(jié)果表明，本研究所設(shè)計(jì)的引物檢測限為ｇ／，

7、－Ａ００１８４ｎｍＬＦＭＤＶ－ＡＦＭＤＶ為ｉ２９ｎｌ＿ＶＳＶ０２６７ｎＶＤＶ．ｓａＩ為０．１ｇ／ｍ，為．０ＬＳｇ／ｇ／ｍ，為化０一２４７ｎｇ／ｍＵ芯片檢測方法靈敏度至少比ＰＣＲ檢測高個數(shù)量級；特異性良好，所設(shè)計(jì)引物沒有出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，能準(zhǔn)確區(qū)分檢測出ＦＭＤＶ、ＶＳＶ、ＳＶＤＶ，并能區(qū)分Ｉ出日蹄疫病毒的Ｈ種血清型；應(yīng)用了兩家公司所生產(chǎn)的不同批次酸基基片進(jìn)行重復(fù)性驗(yàn)證°Ｃ，均能夠較好地實(shí)現(xiàn)重復(fù)