白木香mapk3基因的克隆及其表達(dá)初探

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3、化冷文白木香ＭＡＰＫ３基因的克隆及其表達(dá)初探Ｗ美慧指導(dǎo)教師姓名一；楊洪申請學(xué)位級別；碩±學(xué)科專業(yè)：微生物學(xué)論文提交日期；２０１５年４月論文答辯日期：２０１５年６月授予學(xué)位單位；東北襪業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期；２０１５年６月答辯委員會主席；王立群教授論文評閱人：束此抑４欠學(xué)ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄ：Ｓ１５４３０ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒ‘ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＭＡＰＫ３ｇｅｎｅｆｒｏｍ幻ｎ口及ａｎｄｒｅｌｉｍｉｎａｒｓｔｕｄｏ

4、ｆｅｘｒｅｓｓｉｏｎｐｙｙｐＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＸｉａｎＭｅｉｈｕｉＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＹａｎＨｏｎｉｐｇｇｙ乂ｓｓｏｃｉａｌｔｅＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＭａｓｔｅｒｐＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｏｆＳｃｉｅｎｃｅＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＤａｔｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅｏｆ２０１５Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｍ摘要ＭＡＰＫ信號級聯(lián)系統(tǒng)在植物生長發(fā)育、生物脅迫和非生物

5、脅迫反應(yīng)、激素反應(yīng)等多種信號傳遞途徑中起著十分重要的作用，它負(fù)責(zé)外來信號的接收傳遞和放大，從而啟動或調(diào)控基因的表達(dá)。珍稀溺危植物白木香是國產(chǎn)沉香的重要來源，健康白木香樹只有受一到外界傷害后才能形成沉香類物質(zhì)。前期研究中，我們從白木香中鑒定了個(gè)顯著受傷ＡＳＳ一１害誘導(dǎo)表達(dá)的倍半鹿合酶基因，并初步鑒定了系列在傷害反應(yīng)中與ＡＳＳ１協(xié)同表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子和蛋白激酶，其中包括ＭＡＰＫ信號級聯(lián)系統(tǒng)。本論文在此基礎(chǔ)上：，對ＡｓＭＡＰＫＪ基因進(jìn)行克隆與表達(dá)分析－ＰＣ民和ＲＡＣＥ的方法克隆到白木香ＡＳＭＡＰＫｃ１．利用ＲＴ３基因的全長ＤＮＡ序列，開放閱讀框長１１１０

6、ｂ碼３６９ｐ，編個(gè)氨基酸?；诎被嵝蛄械南到y(tǒng)進(jìn)化分析顯示一，本研究獲得ＭＡＰＫ３基因與甜瓜的的ＭＡＰＫ３基因形成個(gè)小的進(jìn)化枝。預(yù)測分析５顯示ＡＳＭＡＰＫ３為親水性蛋白且為不穩(wěn)定蛋白，不穩(wěn)定系數(shù)為４１．１５，等電點(diǎn)ｐｉ．４２，亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，ＡＳＭＡＰＫ３主要集中在細(xì)胞核上。２．Ｗ白木香根、莖、葉為實(shí)驗(yàn)材料，對ＡＳＭＡＰＫ３基因的組織表達(dá)情況進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，ＡＳＭＡＰＫ３在葉子中的表達(dá)量最高，其次是莖，花中的表達(dá)量最低。對白木香的懸浮細(xì)胞進(jìn)行榮莉酸甲酷和水楊酸兩種化學(xué)傷害處理，研究在傷害脅迫下的表達(dá)模式，結(jié)果顯示，傷害信號可Ｗ調(diào)控ＡＳＭ

7、ＡＰＫ３基因表達(dá)，在傷害處理２４ｈ內(nèi)，基因的表達(dá)量有提高，隨后均有明顯降低?；蛟诓煌瑐μ幚硐卤磉_(dá)量有所不同。３．利用基因槍法對ＡＳＭＡＰＫ３的亞細(xì)胞定位進(jìn)行研究，結(jié)果顯示ＡＳＭＡＰＫ３在洋蔥表皮細(xì)胞中定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞核。－２－ｓ４胸建ｐＥＴ８ａＡＭＡＰＫ３的原核表達(dá)載體，通過設(shè)計(jì)不同的溫度、轉(zhuǎn)速及ＩＰＴＧ°的濃度摸索融合蛋白的最適誘導(dǎo)表達(dá)條件。結(jié)果濕示，在３７Ｃ下，０４ｎｉＭＩＰＴＧ誘導(dǎo)．４ｈ，成功誘導(dǎo)出目的融合蛋白。一ＡＡＰＫ本論文的結(jié)果將為進(jìn)步研