苯并[a]芘對(duì)櫛孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究

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1、相料義＊變＇ＭＶｏｎ．ＡＮＩＩＲＳＩ（）！ｎＵＮＡ碩ｄｂ學(xué)位論文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮｉ１論文題目：苯并Ｍ巧對(duì)巧孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究ＳｔｕｄｏｎＭｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒＲｅｒｏｄｕｃｔｉｖｅＴｏｘｉｃｉｔｙｐｙ：ｏｆＳｃａｌｌｏＣｈ英文題目Ｂｅｎｚｏｇｒｅｎｅｏｎｌａｍｓａｒｒｅｒｉ［］ｐｙｐｙｆ作者：鄧旭化指導(dǎo)教師：潘魯青教授學(xué)位類別；全日制學(xué)術(shù)學(xué)位專業(yè)名稱：水生生物學(xué)研究方向：水生動(dòng)物

2、生理學(xué)？’—．：麻？廠‘一叫—；：少接巧巧敬冰謹(jǐn)＞（１＾此論文獻(xiàn)給研究海洋軟體動(dòng)物生殖毒性的科研工作者！苯并［ａ］巧對(duì)巧孔扇貝生殖毒性化制的研究學(xué)位論文答辯日期：氣等專三指導(dǎo)教師簽字：：答辯委員會(huì)成員簽字抑爭(zhēng)ｌｂＩ，獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研巧成果，，。據(jù)我所知除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過(guò)的材料。與我一同

3、工作的同志對(duì)本研巧所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：興地池簽字日期：年ｉ：月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)?？蓪W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可采用＇影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研巧所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)

4、公眾提供信息服務(wù)。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：個(gè)導(dǎo)師簽字：■年ｒ簽字日期；年月三怕簽字日期；＞１５月苯并［ａ］巧對(duì)巧孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究苯并［ａ］巧對(duì)巧孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究摘要ｌｃｃｌｉＨ本文參照目前我國(guó)近海多環(huán)芳炫（ＰｏｙｙｉｃＡｒｏｍａｔｃｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ，ＰＡＨｓ）一ｅｎｚｏｅｎｅａ代表物質(zhì)之苯并ａｒＢＰ）的真實(shí)括染程度，近海養(yǎng)殖重［ａ］巧（ｂ，［］ｐｙ要經(jīng)濟(jì)貝類巧孔扇貝（Ｃ／，ａＰ脅迫下７始為研巧對(duì)象篩選了Ｂ

5、性腺差異表達(dá)基因，測(cè)定了巧孔扇貝性腺及血淋己性激素含量，探究了多濃度多時(shí)間點(diǎn)ＢａＰａＰ、脅迫下生殖毒性響應(yīng)關(guān)鍵基因的表達(dá)模式，并研究了Ｂ脅迫對(duì)巧孔扇貝卵巢精巢ＤＮＡ單鏈斷裂Ａ含量影響，最后Ｌ組織顯微切片、蛋白質(zhì)叛基含量、ＭＤ：Ａ的方式驗(yàn)證Ｂ沁對(duì)巧孔扇貝性腺造成的生殖毒性。得到的具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：１．巧孔扇貝在ＢａＰ脅迫下性腺差異表達(dá)基因的篩選與分析本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)（Ｄｉｇｉｔａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＤＧＥ）根據(jù)巧孔扇貝性腺組織對(duì)照組和化卽ｇ／ＬＢａＰ

6、染毒組ｌＯｄ的ＤＧＥ數(shù)據(jù)對(duì)比篩選差異表達(dá)基因１２４８５０５５和１４４５４１２７ｃｌｅａｎ。其中精巢組織對(duì)照組與染毒組分別獲取條ｒｅａｄｓ，將ｃｌｅａｎｒｅａｄｓ與本實(shí)驗(yàn)室己提交的巧孔扇貝轉(zhuǎn)錄組（ＳＲＰ０１８０４４）ｕｎｉｇｅｎｅ進(jìn)行拼接比對(duì)，比對(duì)率分別為７４．２４％和７７．２７％過(guò)數(shù)據(jù)分析，共篩得差異；通表達(dá)基因１０５１條，其中上調(diào)基因２２３條，下調(diào)基因８２８條。經(jīng)ＧＯ功能聚類分析顯示，差異基因主要涉及芳香族化合物代謝、ＡＴＰ代謝、免疫防御、細(xì)胞調(diào)亡和精子發(fā)育、精子分化等功能；ＫＥ

7、ＧＧ通路分析表明富集顯著的代謝通路包括Ｓ－幾酸循環(huán)通路、氧化憐酸化通路、ＮＯＤｌｉｋｅ受體信號(hào)通路、類固醇合成通路等。運(yùn)用實(shí)時(shí)巧光定量ＰＣＲ（－ＱＲＴＰＣＲ）技術(shù)，選?。箺l差異表達(dá)關(guān)鍵基因（ＨＳＰ９０、ＣＹＰ３Ａ、ＨＧＤ、ＣＤＫ２、ＩＡＰ、ＴＳＳＫ２、ＰＤＥ５和１７ＨＳＤ、Ｅ２ＳＵＬＴ）驗(yàn)證了ＤＧＥ結(jié)果的可靠性。卵巢組織對(duì)照組和染毒組ＤＧＥ分別獲取１３，６６６，８８２和］４，２７６，５７９條ｃｌｅａｎｒｅａｄｓ７４．４，比對(duì)率分別為．５５％和７８６％，共篩得差異表達(dá)

8、基因１２４條，其中上調(diào)基因４２條，下調(diào)基因８２條。與苯并巧生殖毒性相關(guān)的差異基因主要聚類于解毒代謝、細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞間相互作用的損傷效應(yīng)、內(nèi)分泌干擾效應(yīng)和組織損傷等效應(yīng)。由Ｗ上看出，巧孔扇貝在ＢａＰ脅迫下精巢的解毒代謝、能量代謝和免疫防御等功能發(fā)生了變化，引起了細(xì)胞調(diào)ｔ等損傷效應(yīng)，并干擾了類固醇（性激素前體物質(zhì)）的合成和精子的形成過(guò)程：卵巢的解毒代謝、細(xì)胞骨架及性Ｉ苯并ａ巧對(duì)巧孔扇貝生