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《日本沼蝦表皮幾丁質(zhì)合成酶基因的克隆及表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、單位代碼10476學(xué)號1204180301分類號Q955碩士學(xué)位論文日本沼蝦表皮幾丁質(zhì)合成酶基因的克隆及表達分析學(xué)科、專業(yè)：生物學(xué)、生理學(xué)研究方向：細胞增殖分化的內(nèi)分泌調(diào)控申請學(xué)位類別：理學(xué)碩士申請人：郭愛蓮指導(dǎo)教師：寧黔冀教授二〇一五年五月獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得河南師范大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對
2、本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。作者簽名:關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解河南師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)河南師范大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）作者簽名:ifi^.導(dǎo)師簽名:CLONINGEPIDERMALCHITINSYNTHASEGENEANDEXPRESSI
3、ONANALYSISFROMMACROBRACHIUMNIPPONENSEADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFμlfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByGuoAilianSupervisor:Prof.NingQianjiMay,2015摘要日本沼蝦（Macrobrachiumnipponense)有堅硬的表皮（又稱外骨骼）
4、，生命的不斷生長要靠周期性蛻皮來實現(xiàn)，周期性蛻皮與生長、發(fā)育和繁殖密切相關(guān)。幾丁質(zhì)是日本沼蝦表皮結(jié)構(gòu)的重要組成成分，每個蛻皮周期必須不斷地合成和分解幾丁質(zhì)，顯然，幾丁質(zhì)的合成對其生長是至關(guān)重要的。幾丁質(zhì)合成酶（Chitinsynthase，CHS）是幾丁質(zhì)合成路徑中的關(guān)鍵酶，了解其基因的結(jié)構(gòu)以及時空表達模式，可以為闡明日本沼蝦等甲殼動物蛻皮周期的機理積累資料。本文根據(jù)同源基因的保守序列，設(shè)計特異性引物，利用SMARTRACE技術(shù)，首次從日本沼蝦頭胸甲組織克隆了幾丁質(zhì)合成酶基因cDNA全長序列。獲得的目的基因
5、全長5133bp，開放閱讀框（ORF）長度為4701bp，編碼1567個氨基酸，提交該序列到GenBank注冊號KP710198，并命名為MnCHS。利用ExPASy在線進行序列分析，該蛋白分子量為179.567kD，理論等電點（pI）為6.09。該蛋白共有16個跨膜螺旋，一個保守結(jié)構(gòu)域Chitin_synth_C，9個保守基序，可分為結(jié)構(gòu)域A、結(jié)構(gòu)域B、結(jié)構(gòu)域C。結(jié)構(gòu)域B中含有7個保守域，并含有CHS的兩個標簽序列EDR和QRRRW。利用MEGA5.05軟件，結(jié)合其他物種CHS基因，采用鄰接法進行聚類分析
6、構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，聚類分析表明屬于A類幾丁質(zhì)合成酶基因。采用實時熒光定量PCR技術(shù)，分析MnCHS基因的時空表達，實驗結(jié)果顯示，MnCHS基因的轉(zhuǎn)錄物在多種組織均有表達，在蛻皮周期各階段，不同組織MnCHS的表達量差異顯著；頭胸甲在A期達到最高，胃腸在D0和D4期均較高，尾扇和肌肉在D4期最高，肝胰腺則普遍較低。結(jié)果表明，MnCHS基因轉(zhuǎn)錄物不僅存在于表皮，在其它組織也有分布，且mRNA水平的變化與蛻皮周期有關(guān)，作為幾丁質(zhì)生物合成的關(guān)鍵酶，推測該基因的表達在新外表皮和內(nèi)表皮的形成中發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞：日本沼
7、蝦，幾丁質(zhì)合成酶基因，序列分析，時空表達IABSTRACTMacrobrachiumnipponensehavehardskin(alsocalledtheexoskeleton),torelyontheperiodicmoltingtoachievethegrowthoflife,theperiodicmoltingiscloselyrelatedtothegrowth,developmentandreproduction.ChitinisanimportantcomponentinMacrobrachi
8、umnipponenseepidermis,andeachmoltingcyclemustcarryonconstantlychitinsynthesisanddegradation,obviously,chitinsynthesisiscrucialforitsgrowth.Chitinsynthase(CHS)isakeyenzymeinthesynthesisofchitin,understandingof
