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《日本沼蝦精子游離和遺傳滅活技術(shù)-研究與頂體反應(yīng)相關(guān)基因的克隆與表達-分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文畸形情況，以檢測X射線對青蝦精子的滅活效果。X射線管照射強度為100kV，5mA，源距10cm，照射時間為0min、30min、60min、90min和120min。照射30min組，抱卵天數(shù)及卵的畸形率較0min組無變化，卵的畸形率為0，卵能正常發(fā)育至孵化出膜。隨著照射時間的增加，在30～90min之間，雌蝦抱卵天數(shù)逐漸減少，且所抱卵的畸形率呈上升趨勢。照射120min組，抱卵天數(shù)較90min組變化不大，卵的畸形率達100%。在本實驗照射時間范圍內(nèi)，確定了滅活青蝦精子遺傳物質(zhì)的最佳照射時間為90～120min。采用彗星實驗的方法
2、檢測經(jīng)X射線處理后的各實驗組青蝦的精子，根據(jù)彗星實驗結(jié)果，推測X射線滅活青蝦精子遺傳物質(zhì)的機理為使得青蝦精子染色體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的變性作用。3、青蝦絲氨酸蛋白酶基因（MnSP）的克隆與表達分析絲氨酸蛋白酶是一種參與精子頂體反應(yīng)的酶，在精子穿透卵膜過程中發(fā)揮重要的作用。本研究利用cDNA末端快速克隆方法獲得了日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)的絲氨酸蛋白酶基因MnSP（GenBank登錄號為KP091755）全長cDNA序列。該基因cDNA全長1792bp，包含132bp的5′末端非翻譯區(qū)，1071bp的開放閱讀框(ORF)和589b
3、p的3′末端非翻譯區(qū)。開放閱讀框編碼357個氨基酸，分子質(zhì)量為39.51KD。氨基酸序列比對分析顯示MnSP與其他物種絲氨酸蛋白酶基因的相似度為31%—42%。不同組織熒光定量PCR檢測顯示：MnSP基因在雌雄蝦的鰓組織里面的表達量均最高；MnSP基因在肝胰腺里面也有表達，且遠遠低于在鰓組織中的表達，其他組織中的表達水平也均顯著低于鰓組織中的表達（P<0.05），這說明MnSP基因在青蝦中除了起到免疫功能外，可能也參與了青蝦的呼吸作用；此外，發(fā)現(xiàn)MnSP基因在雌雄蝦成體的肌肉組織中均沒有表達，說明該基因與成體青蝦的生長無關(guān)；MnSP基因在精巢中沒有表達，
4、在輸精管中的表達也極低，而在卵巢中表達顯著高于在精巢和輸精管中的表達，并且在雌雄蝦的相同組織（鰓、肝胰腺、心臟）中的表達量相比較發(fā)現(xiàn)，雌蝦中的表達量均高于在雄蝦中的表達量，說明MnSP基因在性腺中具有表達特異性，僅在雌性性腺中具有表達，且在其他組織中的表達也存在性別差異，推測MnSP基因是與性別差異相關(guān)的基因。不同發(fā)育時期熒光定量PCR檢測顯示：MnSP基因在胚胎發(fā)育各時期、出膜后幼體期、變態(tài)后發(fā)育時期均有表達，整體表現(xiàn)為在胚胎發(fā)育各時期的表達量高于出膜后及變態(tài)后各發(fā)育時期，表達變化趨勢由高表達變?yōu)榈捅磉_，在胚胎發(fā)育的囊胚期表達量顯著升高至頂峰，其后又降
5、低，這可能是由于囊胚期細胞的分化最為旺盛，推測MnSP基因參與胚胎細胞的分化，并且當蝦出膜后，MnSP基因參與幼蝦生長發(fā)育的作用明顯降低。II萬方數(shù)據(jù)上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文本文首次采用胰蛋白酶消化法成功獲得了數(shù)量多且存活率高的游離青蝦精子，得到了胰蛋白酶消化精莢的最佳處理條件，為青蝦精子的遺傳操作提供了方法上的支持；首次通過X射線照射雄蝦實現(xiàn)了青蝦精子遺傳物質(zhì)的滅活，為進一步開展青蝦雌核發(fā)育研究提供了條件；首次克隆了青蝦絲氨酸蛋白酶基因，并且研究了該基因在雌雄蝦不同組織以及發(fā)育過程的表達特征，有助于闡明青蝦精子頂體反應(yīng)乃至受精過程的遺傳機制。關(guān)鍵詞：青
6、蝦，日本沼蝦，游離精子，遺傳滅活，基因克隆，絲氨酸蛋白酶III萬方數(shù)據(jù)上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文StudyonDissociatingSperms,GeneticalInactivationofSpermsandMolecularCloningandGeneExpressionofAcrosomalReactionRelatedGeneinMacrobrachiumnipponensisAbstractMacrobrachiumnipponensisisanimportantfreshwaterspecieswithhigheconomicprofitsi
7、nChina,whichisalsocalledfreshwatershrimp.Gynogenesisisanimportantgenetictechniquewhichplaysaroleinestablishinggeneticidentitygenealogyandresearchingthesexdeterminationmechanism.Gynogenesisisalsoasignificantbreedingtechnique,especiallyusedincontrollingsex.Gynogenesisisadevelopment
8、alpattern,andinthispattern,spermscanente
