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《豬輪狀病毒的分離鑒定及其環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)檢測(cè)方法的建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、密級(jí)：論文編號(hào)：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)貌學(xué)位論文豬輪狀病毒的分離鑒定及其環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)檢測(cè)方法的建立IsolationandCharacterizationofPorcineRotavirusfromtheLiaoningProvinceandDevelopmentofLoop-mediatedIsothermalAmplification碩士研宄生：張賀偉指導(dǎo)教師?.武華研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：動(dòng)物疫苗與分子免疫培養(yǎng)單位：特產(chǎn)研究所研宄生院2015年06月Secrecy:No.Chines
2、eAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIsolationandCharacterizationofPorcineRotavirusfromtheLiaoningProvinceandDevelopmentofLoop-mediatedIsothermalAmplificationM.S.Candidate：HeweiZhangSupervisor：Prof.WuHuaMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty：AnimalVa
3、ccineandMoleculerImmunologyChineseAcademyofAgriculturalSciencesJune2015獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時(shí)間：丨5■年5月這円關(guān)于論文使用授權(quán)的聲
4、明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，§卩：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：時(shí)間：2〇/5年5月IS曰導(dǎo)師簽名：時(shí)間：M5年S月丨&R中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目豬輪狀病毒的分離與鑒定及其LAMP檢測(cè)方法的建立預(yù)防獸醫(yī)動(dòng)物疫苗與論文作者張賀偉專業(yè)研究方向?qū)W分子免疫指導(dǎo)教師武華培養(yǎng)單位（研
5、宄所）特產(chǎn)研宂所碩（博）姓名職稱單位專業(yè)簽名導(dǎo)師評(píng)碩導(dǎo)口胡桂學(xué)教授吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)■閱碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州劉在新研宄員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)人博導(dǎo)■獸醫(yī)研宄所答辯主席碩導(dǎo)口錢愛東教授吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)■碩導(dǎo)口軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事王興龍研宄員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)■獸醫(yī)研宄所碩導(dǎo)口高豐教授吉林大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)■答碩導(dǎo)■傅殿國研究員吉林省畜牧獸醫(yī)總站預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口辯碩導(dǎo)■吉林特研生物技術(shù)有吳威研究員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口限公司委員會(huì)議記錄（秘書）范琳琳論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015年5月17日長春所區(qū)七樓會(huì)議室摘要輪狀病毒（R
6、otavirus）作為一種重要的腸道微生物，能造成多種小動(dòng)物和新生嬰幼兒腹瀉。PoRV與PEDV、TGEV并稱為引起腹瀉的三大病毒。目前，在世界上許多國家和地區(qū)均發(fā)現(xiàn)輪狀病毒可引起相關(guān)腹瀉疾病，對(duì)農(nóng)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本實(shí)驗(yàn)室自2013年到2014年，在全國不同省市和地區(qū)采集腹瀉樣品362份，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，檢測(cè)結(jié)果顯示，362份樣品中，PEDV的陽性樣品數(shù)為223份，陽性率為61.6%,TGEV的陽性樣品數(shù)為2份，陽性率為0.55%；PoRV的陽性樣品數(shù)為8份，陽性率為2.2%；PKV的陽性樣品數(shù)為66份，
7、陽性率為18.23%。將來自江蘇省某發(fā)病豬場(chǎng)的輪狀病毒陽性樣品處理并與20ug/mL胰酶等體積混合后接種至MA-104細(xì)胞上，盲傳8代，細(xì)胞出現(xiàn)變圓、拉網(wǎng)、脫落等病變。PCR及測(cè)序結(jié)果顯示為豬輪狀病毒，命名為JS株。三次蝕斑克隆純化后測(cè)定TCID50-6.875為10/mL，中和試驗(yàn)用病毒的最佳稀釋倍數(shù)為150倍，并建立抗體檢測(cè)方法。JS分離株的VP4基因型與P[7]基因型同源性最高，VP7基因型與G[9]基因型同源性最高。根據(jù)A群輪狀病毒最新分類方法，JS分離株屬于P[7]G[9]型。采用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，建立
8、了一種快速檢測(cè)輪狀病毒的實(shí)驗(yàn)方法。結(jié)果顯示，當(dāng)反應(yīng)體系中甜菜堿濃度為0.8M，鎂離子濃度為2mM，最佳反應(yīng)溫度為63℃時(shí)反應(yīng)60min，擴(kuò)增可達(dá)最佳效果。且該方法特異性良好，靈敏度為RT-PCR的100倍?？捎糜诂F(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，具有良好的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：豬輪狀病毒，流行病學(xué)調(diào)查，分離，鑒定，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增IABSTRACTPorcinerotavirusesbe
