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《快速檢測非洲豬瘟病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法的建立.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIoNSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREEConstructionofLoop--mediatedIsothermalAmplificationforRapidDetectionofAfrican一‘1n—Swine一’everVirusWUXulongDirectedbyProf．WangYinYa’an，SichuanChinaJun
2、e2014萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生妣緲笏削烀加廠曬關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)
3、印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。泓降參只，據(jù)知，妒年彳月陽、夠下緲葉鶴魄攔滏艇師萬方數(shù)據(jù)中文摘要非洲豬瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一種高致病率和死亡率的急性、烈性、接觸性的傳染病，強(qiáng)毒株感染后導(dǎo)致動物100％的死亡率，而目前針對非洲豬瘟還并沒有有效的疫苗給以預(yù)防，該病對全
4、球的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的威脅和經(jīng)濟(jì)損失。我國目前雖然尚無非洲豬瘟疫病的發(fā)生，但是隨著日漸頻繁的進(jìn)出口貿(mào)易發(fā)展，以及人員流動的來往，該病傳入我國的可能性也隨之增大。為了能及時的檢測出非洲豬瘟，預(yù)防該病傳入我國，因此建立一種快速高效檢測非洲豬瘟病毒的實驗室診斷方法顯得非常重要，本研究在分子生物學(xué)的基礎(chǔ)上，利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(100p．mediatedisothermalamplification，LAMP)快速、簡便的特性，建立了一種快速檢測非洲豬瘟病毒LAMP方法。本試驗根據(jù)NCBI己登錄的非洲豬瘟K205
5、R基因序列，人工合成該基因質(zhì)粒作為試驗所需模板。通過在線軟件，根據(jù)LAMP引物設(shè)計原理，針對非洲豬瘟病毒K205R基因序列設(shè)計了一套特異性引物，在進(jìn)行反應(yīng)條件優(yōu)化后成功建立了非洲豬瘟病毒的LAMP檢測方法。通過對反應(yīng)產(chǎn)物的鑒定分析，靈敏度試驗以及和常規(guī)PCR方法進(jìn)行對比，結(jié)果表明所建立的非洲豬瘟LAMP檢測方法可檢出低于lO拷貝數(shù)的非洲豬瘟DNA，其靈敏度更高于常規(guī)PCR，且特異性和穩(wěn)定性良好。此方法簡單、快速，在恒溫水浴鍋中63℃反應(yīng)45min即可完成。反應(yīng)產(chǎn)物除通過瓊脂糖凝膠電泳分析外，還可進(jìn)行可視
6、化檢測，陽性反應(yīng)管在自然光下變得渾濁，加入熒光染料在紫外燈照下有綠色熒光的出現(xiàn)。正因為LAMP產(chǎn)物能進(jìn)行可視化檢測這一特性，加上反應(yīng)條件簡便，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備的特點，LAMP已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種疫病的檢測，是一種適用于實驗室和現(xiàn)場快速檢測的方法。本試驗方法的建立為我國預(yù)防非洲豬瘟疫病的傳入提供了參考。關(guān)鍵詞：非洲豬瘟；K205R；LAMP萬方數(shù)據(jù)萬方數(shù)據(jù)ConstructionofLoop—mediatedIsothermalAmplificationforRapidDetectionofAfrica
7、nSwineFeverVirusWUXulong(preventiveVeterinaryMedicine)DirectedbyProf．WangYinAbstractAfricanswinefever(ASF)isahighacutemortalitydiseasecausedbytheAfricanswinefevervirus(Africanswinefevervirus，ASFV)，whichiscausedpotent，contiguousandinfectious．Themortalityo
8、ftheanimalsreachesto100％aftertheinfectionofthevirulentstrain．ThereisnoeffectivepreventivevaccineforAfricanswinefeveratpresent．Theglobalpigindustryisinfluencedbythisdisease，anditcausedahugethreatenandeconomiclosses．Although
