銀花泌炎靈片抗炎作用及其機制研究

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1、銀花泌炎靈片抗炎作用及其機制研究ResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuaMiyanlingTablet作者姓名：賽景影專業(yè)名稱：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：王放教授學(xué)位類別：理學(xué)碩士答辯日期：2015年5月20日中文摘要銀花泌炎靈片抗炎作用及其機制研究銀花泌炎靈片為采用現(xiàn)代工藝精制而成的中成藥制劑，其組方由金銀花、半枝蓮、萹蓄等十味中藥材組成，是治療泌尿系統(tǒng)感染的臨床常用藥物，現(xiàn)已成為泌尿系統(tǒng)感染治療的首選中藥之一。以往研究認(rèn)為該藥具

2、有抗菌、清熱解毒、通淋利尿、補腎固本，活血化瘀、提高機體免疫力等作用。本研究組應(yīng)用現(xiàn)代藥理學(xué)研究技術(shù)發(fā)現(xiàn)銀花泌炎靈片具有抑制大腸埃希菌生長的作用，對大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922和產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的MBC50-90分別為100mg/mL和150-250mg/mL,但其是否具有抗炎作用及抗炎機制尚不清楚。本研究從細(xì)胞學(xué)水平證明銀花泌炎靈片具有抗炎作用，并應(yīng)用炎癥因子芯片初步探討了其抗炎機制，為了該藥的進(jìn)一步臨床應(yīng)用及推廣提供實驗和理論依據(jù)。實驗方法：1.藥物抗炎活性研究：采用Ficoll密度梯度離心法分離健康人外周

3、血單個核細(xì)胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC），以無菌的脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）刺激PBMC，建立炎癥模型。實驗分組：正常對照組（給予無菌細(xì)胞培養(yǎng)液），模型組（LPS炎癥模型組），藥物治療組（造模后給藥組）。造模后，以正常對照組作為對照，應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽（Fourmethylthiazolyltetrazoliumsalt,MTT）法測定藥物治療組的細(xì)胞毒性。為確認(rèn)藥物治療組細(xì)胞在藥物作用前后的數(shù)量未發(fā)生明顯變化，先以臺盼藍(lán)法計數(shù)藥物作用前及作用后活細(xì)

4、胞率，再以（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IIL-6、IL-10、MCP-1的蛋白表達(dá)水平。2.藥物抗炎機制研究：以2TMPAHS-097ZA-2RTProfilerPCRArrayHumaninflammasomes炎癥因子芯片法高通量篩選藥物的炎癥因子作用靶點及相關(guān)通路，應(yīng)用MatLab聚類分析技術(shù)和KEGG數(shù)據(jù)庫等方法對篩選結(jié)果進(jìn)行分析。實驗結(jié)果：銀花泌炎靈片對PBMC的半數(shù)抑制濃度（halfmaximalinhib

5、itoryconcentration，IC50）為4.05mg/mL；藥物作用前后各組細(xì)胞存活率均>95%；藥物治療組和模型組相比較，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和MCP-1顯著降低（P＜0.01）。HumaninflammasomesPCRArray芯片結(jié)果顯示：藥物治療組與模型組相比較，15個基因出現(xiàn)差異表達(dá)（表達(dá)倍數(shù)>2.0）；Pathway分析結(jié)果顯示：出現(xiàn)差異表達(dá)的15個基因主要關(guān)聯(lián)在NOD樣受體和Toll樣受體（NOD-likereceptor和Toll-likereceptor）pathway上

6、。結(jié)論：銀花泌炎靈通過降低IL-1β和IL-18等炎癥因子的分泌而發(fā)揮抗炎作用，其機制主要是該藥物影響了NOD樣受體和Toll樣受體Pathway中的炎癥相關(guān)基因NLRP3、NLRP1以及caspase-1等的表達(dá),從而抑制了下游的炎癥反應(yīng)。關(guān)鍵詞：銀花泌炎靈片；炎癥反應(yīng)；固有免疫；PBMC；炎癥因子；NLRP3IIAbstractResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuamiyanlingTabletYinhuanmiyan

7、lingTabletsisoneofproprietaryChinesemedicinewhichcomposedbyhoneysuckle,Scutellariabarbata,knotgrassandotheringredients,istheclinicalcommonlyuseddrugsforthetreatmentofurinarysysteminfections,ithasbecomeoneofthepreferredChinesemedicineforthetreatmentofurinarytractinf

8、ections.Previousstudiessuggestthatthemedicinehasthefunctionsofanti-bacteria,detoxification,leachingdiuresis,kidneyfoundation,andbloodcirculation,