泥鰍養(yǎng)殖水體中芽孢桿菌的篩選、生長(zhǎng)特性及其應(yīng)用效果研究

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1、論文題目泥鰍養(yǎng)殖水體中芽孢桿菌的篩選、生長(zhǎng)特性及其應(yīng)用效果研究研究生姓名何沅濱指導(dǎo)教師姓名李義專(zhuān)業(yè)名稱水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向水產(chǎn)動(dòng)物疾病論文提交曰期2015年4月蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研宄工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名:蘇州大

2、學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所（含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤(pán)版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在____年_月解密后適用本規(guī)定。非涉

3、密論文1^/論文作者簽名：^>^'/K日期：tl泥鰍養(yǎng)殖水體中芽孢桿菌的篩選、生長(zhǎng)特性及其應(yīng)用效果研究中文摘要中文摘要氨氮、亞硝態(tài)氮的積累和有機(jī)物污染是泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)池塘養(yǎng)殖水體惡化，病害頻發(fā)及品質(zhì)下降的主要原因。利用水中有益微生物對(duì)已污染的養(yǎng)殖水環(huán)境進(jìn)行生物修復(fù)是目前研究與開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)，而通過(guò)篩選獲得凈水效果和制劑生產(chǎn)性能優(yōu)良的優(yōu)勢(shì)菌株是研發(fā)高效微生態(tài)制劑的關(guān)鍵。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖用益生菌制劑很多，但針對(duì)泥鰍使用的益生菌的篩選、生長(zhǎng)特性及應(yīng)用研究則未見(jiàn)報(bào)道。本研究從泥鰍養(yǎng)

4、殖池塘水中分離篩選出1株益生枯草芽孢桿菌(NQ1)，考察了NQ1的生長(zhǎng)特性、培養(yǎng)特性、安全性、水質(zhì)凈化效果以及對(duì)泥鰍免疫功能影響，試驗(yàn)結(jié)果可為在泥鰍養(yǎng)殖中推廣應(yīng)用提供依據(jù)。研究獲得的具體結(jié)果如下：1．泥鰍養(yǎng)殖水體中益生芽孢桿菌的篩選從泥鰍養(yǎng)殖池塘水樣中分離純化得到4株芽孢桿菌，經(jīng)過(guò)降解氨氮、亞硝態(tài)氮能力篩選試驗(yàn)，獲得1株優(yōu)勢(shì)目的菌株，命名為NQ1。在模擬淡水中，在氨氮、亞硝態(tài)氮初始濃度分別為5mg/L和2mg/L時(shí)，2d后菌株NQ1對(duì)氨氮的降解率為33.5%，對(duì)亞硝態(tài)氮的降解率為99.2%。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和生

5、理生化特性結(jié)果，將其初步鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。經(jīng)生長(zhǎng)特性研究表明，枯草芽孢桿菌NQ1可在培養(yǎng)6h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在培養(yǎng)16h后即達(dá)到穩(wěn)定生長(zhǎng)階段；同時(shí)對(duì)溫度、鹽度、pH都具有較好的適應(yīng)性。安全性試驗(yàn)證實(shí)，試驗(yàn)濃度(最高為1×107cfu/mL)的枯草芽孢桿菌NQ1對(duì)泥鰍安全。此外，將1×107cfu/mL的NQ1與1×107cfu/mL的嗜水氣單胞菌混合添加至養(yǎng)殖水體中，以空白組為陰性對(duì)照組，以添加1×107cfu/mL嗜水氣單胞菌的試驗(yàn)組為陽(yáng)性對(duì)照組，暫養(yǎng)泥鰍14d，結(jié)果

6、顯示，NQ1與嗜水氣單胞菌混合添加組的泥鰍存活率較陽(yáng)性對(duì)照組高25%。2．枯草芽孢桿菌NQ1的生長(zhǎng)特性及培養(yǎng)基的優(yōu)化以普通牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為初始培養(yǎng)基，研究了不同培養(yǎng)時(shí)間、初始pH值、溫度、鹽度(NaCl濃度)、轉(zhuǎn)速、裝液量和接種量對(duì)芽孢桿菌NQ1生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明：菌株NQ1最大活菌數(shù)的培養(yǎng)條件為發(fā)酵時(shí)間20h，初始pH7.4，溫度為28℃，鹽度為0.5%(w/v)，轉(zhuǎn)速為180r/min，裝液量為80mL/250mL，接種量為10%。采用單因子試驗(yàn)和L4)正交試驗(yàn)優(yōu)化了種子培養(yǎng)基的組成，結(jié)果表明，9

7、(3I中文摘要泥鰍養(yǎng)殖水體中芽孢桿菌的篩選、生長(zhǎng)特性及其應(yīng)用效果研究實(shí)驗(yàn)條件下的最佳種子培養(yǎng)基為：蛋白胨為(2%)(w/v)、葡萄糖為(2%)(w/v)、NaCl為(0.3%)(w/v)，三種成份對(duì)NQ1菌株產(chǎn)活菌數(shù)影響力大小順序?yàn)榈鞍纂?、NaCl、葡萄糖。以上述最佳種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，NQ1菌株產(chǎn)活菌數(shù)達(dá)10.44×108cfu/mL。3．枯草芽孢桿菌NQ1對(duì)泥鰍養(yǎng)殖水質(zhì)的影響以0、1×105、1×106和1×107cfu/mL的濃度將枯草芽孢桿菌NQ1添加至養(yǎng)殖水體中，考察NQ1對(duì)泥鰍水質(zhì)指標(biāo)的影響。結(jié)果表明

8、，NQ1使用14d后，1×107cfu/mL濃度組的氨氮降解率(52.67%)、亞硝態(tài)氮降解率(50.18%)和硫化物降解率(48%)均為3個(gè)試驗(yàn)組中的最高值，而且pH波動(dòng)最小(7.76～7.65)。由此表明，1×107cfu/mL的枯草芽孢桿菌NQ1對(duì)凈化泥鰍養(yǎng)殖池塘水質(zhì)具有明顯的作用。4．枯草芽孢桿菌NQ1對(duì)泥鰍消化酶活性及非特異性免疫的影響以0(對(duì)照)、1×105(低濃度)、1×106(中低濃