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《豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、密級：無論文編號：82110-2012-06中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學位論文豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究TheResearchAndEvaluationofReferenceStandardofPorcineCircovirusType2InactivatedVaccine(課題來源十二五”科技基礎性工作專項重點項目編號：2013FY113300-3)研究生：王曉卉指導教師：王在時研究員申請學位類別:農學碩士學科專業(yè)：預防獸醫(yī)學研究方向：獸醫(yī)微生物與免疫學位授予單位:中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所2015年5月獨創(chuàng)性聲明木人鄭重聲明：所呈交的學位論文，
2、是本人在導師指導K，進行研究工作所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的閃容外，本學位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、己公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內容，也不包含為獲得中國獸丨欠:藥品監(jiān)察所或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任巾木人承擔。學位論文作者簽名：I%4w//年r月/rn關于論文使用授權的說明本人完全了解中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：中監(jiān)所有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或彳
3、H描等復制手段保存、匯編學位論文。同意中國獸民藥品監(jiān)察所可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。(保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議）研究生簽名：時間：>//年及月/」'日時間：年《月/r日中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學位論文摘要摘要豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircovirusType2，PCV2）是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(post-weaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)等疾病的主要病原，給不少豬場造成了巨大的經(jīng)濟損失。為防控豬圓環(huán)病毒病，我國農業(yè)部自2010年批準了首個豬圓環(huán)病毒疫苗
4、豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（SH株）之后，兩年間又先后批準了LG株、DBN-SX07株、WH株和ZJ/C株全病毒滅活疫苗。截至目前，我國共批準了5個毒株的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗，分別由16家生物制品企業(yè)生產。然而各個毒株疫苗的質量標準中的效力檢驗方法均不相同，許多疫苗仍在用傳統(tǒng)的豬檢法進行檢驗，面臨著篩豬難且試驗費時費力的問題，這勢必造成檢驗監(jiān)督機構在疫苗檢測、監(jiān)督和規(guī)范化管理的實施上難度加大，同時，SH株疫苗效力檢驗應用的小鼠免疫試驗法雖最為簡便快速，但缺乏規(guī)范化的參考品供應。因此，我們需要盡快研制出豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品，為該類疫苗檢驗提供一把準確可靠的標
5、尺，規(guī)范疫苗的質量。本研究選擇質量符合要求的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（SH株）成品作為該參考品的候選物，無菌分裝于西林瓶中制備出該參考品，并對其各項特性值進行了測定，均符合要求。同時，對該參考品進行了仔豬攻毒試驗，驗證了參考品的保護效力，建立了參考品替代方法與傳統(tǒng)方法的相關性，證明了該參考品可以作為PCV2滅活苗質量控制的實物標尺。隨后，為了建立更加客觀準確的疫苗效力檢驗體外替代方法，本研究摸索了該參考品進行熒光定量PCR檢測時應用的最佳破乳方法，建立了進行豬圓環(huán)病毒2型病毒定量檢測的熒光定量PCR方法，對其反應條件進行優(yōu)化和驗證，并探索了該方法作為疫苗效力
6、檢驗替代方法的可行性。結果表明，直接檢測疫苗破乳水相中的病毒核酸拷貝數(shù)與小鼠免疫試驗法測定結果之間具有高度相關性，該方法作為參考品效力檢驗替代方法具有很強的可行性。此外，針對各毒株疫苗效檢方法各不相同的問題，本研究還對該參考品對其它毒株產品應用小鼠免疫試驗法進行檢驗的參考覆蓋性進行初步探索，以期將使該參考品成為多種毒株疫苗質量控制的通用標尺，但初步結果表明以當前的方法，該參考品不具有參考覆蓋性，其正確應用方法尚待進一步研究和驗證。最后，為獲得更加準確的定值結果，組織了包括本實驗室在內的4家單位進行協(xié)作標定，通過對各家試驗原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，將各單位測定的不
7、確定度引入到定值結果中，完成了豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的最終定值。關鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型滅活苗，參考品，仔豬攻毒試驗，熒光定量PCR，協(xié)作標定I中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學位論文ABSTRACTABSTRACTPorcineCircovirusType2(PCV2)isthemainpathogenofpost-weaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWS),whichhascausedsevereeconomiclossestotheswineindustry.Topreventandcontrolthecontagio
8、nofPCV2,theMinistryofAgriculturea
