白靈菇雜交育種快速篩選體系的構(gòu)建

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI碩士學(xué)位(畢業(yè))論文白靈菇雜交育種快速篩選體系的構(gòu)建學(xué)位申請(qǐng)人:李莎指導(dǎo)教師:李明教授劉宇研究員學(xué)科專業(yè):蔬菜學(xué)學(xué)位類別:農(nóng)學(xué)碩士授予單位:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期:二〇一五年六月六日分類號(hào)?S646.9單位代碼:10086密級(jí):公開(kāi)學(xué)號(hào):2012240白靈菇雜交育種快速篩選體系的構(gòu)建ConstructionofarapidscreeningsystemformushroombreedinginPleurotusnebrodensis學(xué)位申請(qǐng)人:李莎指導(dǎo)教師:李明

2、教授劉宇研究員學(xué)科專業(yè):蔬菜學(xué)學(xué)位類別:農(nóng)學(xué)碩士授予單位:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期:二〇一五年六月六日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果,也不包含為獲得河北農(nóng)ik大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均巳在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名-簽字丨1期:年么月F1學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解河北農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)

3、保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)河北農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)教抿庫(kù)講行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名:導(dǎo)師簽名:簽字円期:;^丨廠年6月S曰簽字円期:年6月"??jī)覍W(xué)位論文作者畢業(yè)后去向:工作單位:電話:通訊地址:郵編;白靈菇雜交育種快速篩選體系的構(gòu)建摘要白靈菇(Pleurotusnebrodensis)又名白靈側(cè)耳、阿魏菇,肉質(zhì)鮮美、風(fēng)

4、味獨(dú)特,是一種營(yíng)養(yǎng)、藥用價(jià)值極高的珍惜食藥用真菌,市場(chǎng)前景廣闊,極具開(kāi)發(fā)潛力。但由于白靈菇栽培品種退化嚴(yán)重、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率低,導(dǎo)致了白靈菇栽培效益低,影響了白靈菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本試驗(yàn)利用分子標(biāo)記技術(shù)建立白靈菇單核菌株交配型的快速鑒別體系和優(yōu)良雜交子的快速篩選體系,以縮短白靈菇雜交育種的周期,為白靈菇育種工作提供理論依據(jù),加快育種進(jìn)程,保證白靈菇產(chǎn)業(yè)健康快速發(fā)展。本研究得到以下結(jié)果:1.采用原生質(zhì)體單核化技術(shù)處理白靈菇菌株H55×I-630,通過(guò)鏡檢得到39個(gè)單核菌株。然后進(jìn)行拮抗試驗(yàn),成功獲得正極性單核菌株為

5、24個(gè),負(fù)極性單核菌株為15個(gè)。隨機(jī)選取正、負(fù)極性單核菌株各5個(gè),與親本菌株進(jìn)行ISSR和SRAP分子標(biāo)記,并進(jìn)行SCAR標(biāo)記的開(kāi)發(fā),得到7對(duì)特異性引物,其中正極性引物為3條,負(fù)極性引物4條。多重PCR驗(yàn)證結(jié)果正確。2.將退化的白靈菇菌株“白10”進(jìn)行原生質(zhì)體單核化,得到52個(gè)單核菌株,將不同極性的單核菌株進(jìn)行拮抗試驗(yàn),挑取拮抗線部位菌絲,得到一株表型良好的雙核菌株,命名為“自雜體45×49”。分別測(cè)定“白10”和“自雜體45×49”的纖維素酶活性和漆酶活性,“自雜體45×49”的酶活性顯著高于退化菌株“白10”,并

6、且利用比色法成功鑒別出退化菌株“白10”,從而對(duì)退化的“白10”進(jìn)行了提純復(fù)壯。在菌絲生長(zhǎng)階段利用YBLB試劑成功鑒別出退化的菌株“白10”;在菌絲發(fā)酵階段利用LBL培養(yǎng)基和懸浮液脫色培養(yǎng)基也成功鑒別出退化的菌株“白10”。3.收集“白靈菇I-6”、“白金信4號(hào)”和“中農(nóng)一號(hào)”菌株的單孢子,并進(jìn)行隨機(jī)配對(duì)雜交,獲得大量雜交子,以不同雜交子和親本的基因組DNA為模板進(jìn)行SRAP和ISSR分子標(biāo)記,分析雜交子與親本的遺傳關(guān)系,并對(duì)雜交子進(jìn)行栽培試驗(yàn),測(cè)定其農(nóng)藝性狀。通過(guò)對(duì)雜交子與親本的遺傳關(guān)系及農(nóng)藝性狀的分析,結(jié)果表明雜

7、交子與親本的遺傳距離越近,則表現(xiàn)型越接近。關(guān)鍵詞:白靈菇;原生質(zhì)體單核化;分子標(biāo)記;雜交育種;篩選體系;構(gòu)建1河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位(畢業(yè))論文ConstructionofarapidscreeningsystemformushroombreedinginPleurotusnebrodensisM.Agr.Candidate:LiShaSupervisor:Prof.LiMingProf.LiuYuMajor:OlericultureStudyfield:Biotechnology&GeneticBreedinginE

8、dibleFungi(CollegeofHorticulture,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001,China)AbstractPleurotusvar.nebrodensisisakindofraremedicinalediblefungi,ofwhichfruitbodyiswhitea

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