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《草魚ajuba蛋白在草魚呼腸孤病毒感染cik細胞過程中的表達及功能探討》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、學校代碼：10264研究生學號：M120104139上海海洋大學碩士學位論文題目：草魚Ajuba蛋白在草魚呼腸孤病毒感染CIK細胞過程中的表達及功能探討Expressionandfunctionalanalysis英文題目：ofgrasscarpAjubaproteinduringGCRVinfectionCIKcells專業(yè)：臨床獸醫(yī)專業(yè)研究方向：水產(chǎn)動物傳染病學姓名：張婭楠指導教師：呂利群教授二O一五年四月十日上海海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術(shù)道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引
2、用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海水產(chǎn)大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年
3、月日日期：年月日上海海洋大學碩士學位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注答辯地點答辯日期上海海洋大學碩士學位論文草魚Ajuba蛋白在草魚呼腸孤病毒感染CIK細胞過程中的表達及功能探討摘要Ajuba屬于LIM蛋白第三類中的Zyxin蛋白家族，含有雙鋅指結(jié)構(gòu)的LIM結(jié)構(gòu)域，其主要作用是參與蛋白質(zhì)之間的相互作用。Ajuba影響著生物體生長發(fā)育的基本過程——有絲分裂，調(diào)控細胞周期；是細胞骨架相關(guān)蛋白，參與細胞粘附及細胞間的信息交流；作為轉(zhuǎn)錄共抑制因子，參與調(diào)解不同的生理過程，甚至與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。而且，Ajuba參與核轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族NF-κB的激活反應，NF-κB能夠調(diào)控很多與
4、早期免疫反應和炎癥反應相關(guān)的分子。草魚呼腸孤病毒引發(fā)的草魚出血病，危及中國淡水養(yǎng)殖業(yè)，給漁民造成極大的損失。針對草魚呼腸孤病毒分子結(jié)構(gòu)及基因功能的研究是明確病毒侵染宿主機制的基礎(chǔ)，而對草魚呼腸孤病毒蛋白與宿主蛋白的相互作用研究則是攻克草魚出血病的重點和難點。基于此，本課題主要從以下幾個方面進行研究：1.草魚Ajuba基因的克隆與表達根據(jù)酵母雙雜交技術(shù)獲得的基因片段設(shè)計特異性引物，結(jié)合RACE技術(shù)，擴增得到草魚Ajuba基因（gcAjuba）cDNA全長3980bp，GenBank登錄號為KC551289.1。其中，5’非編碼區(qū)1215bp，3’非編碼區(qū)644bp，開放閱讀框（O
5、RF）2121bp，編碼706個氨基酸，分子量約為75.966kDa。等電點（pI）為7.87，不穩(wěn)定系數(shù)為64.48。生物學分析，蛋白gcAjuba含有3個碳末端保守LIM結(jié)構(gòu)域。氨基酸比對發(fā)現(xiàn)，gcAjuba與斑馬魚Ajuba氨基酸序列同源性最高，與哺乳動物Ajuba也具有較高的同源性。系統(tǒng)進化分析顯示，gcAjuba與魚類親緣關(guān)系最近，與哺乳動物親緣關(guān)系最遠。2.GCRV-JX01感染下gcAjuba基因的表達研究為明確草魚呼腸孤病毒感染條件下gcAjuba的表達模式，設(shè)計實驗檢測gcAjuba在GCRV-JX01感染后0h、4h、8h、12h、24h五個時間點轉(zhuǎn)錄水平表
6、達情況，使用相對定量的方法，以草魚EF1a為內(nèi)參基因，檢測gcAjuba基因在不同時間的表達水平差異。結(jié)果顯示，gcAjuba在GCRV-JX01病毒毒株感染刺激后4h達到最高表達量，且明顯上調(diào)。說明gcAjuba基因是一個病毒可誘導基因，參與草魚呼腸孤病毒侵染宿主途徑。3.草魚Ajuba與GCRVNS26相互作用的初步探究成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-gcAjuba和pcDNA3.1-NS26，共轉(zhuǎn)入草魚CIK細胞。亞細胞定位顯示，草魚蛋白gcAjuba和病毒蛋白NS26均分布于細胞質(zhì)中，但兩者I上海海洋大學碩士學位論文表達位置并沒有完全重疊。應用免疫共沉淀技術(shù)，證明融合蛋白G
7、FP-gcAjuba和His-NS26之間沒有直接相互作用。本研究成功克隆草魚Ajuba基因，首次獲得草魚AjubacDNA序列全長，并對其蛋白序列進行結(jié)構(gòu)與生物學分析，為進一步探究草魚Ajuba的生物學功能做好鋪墊。而且證明gcAjuba是草魚呼腸孤病毒感染細胞下的可誘導蛋白，結(jié)合Ajuba參與免疫系統(tǒng)這一論斷，為草魚呼腸孤病毒的防控機制提供新的思路。然而，由酵母雙雜交實驗得出的gcAjuba與NS26的相互作用在體外實驗中并未得到驗證?？赡苄枰獜腁juba蛋白自身的生物學修飾或者某種間接
