飼用益生菌的篩選及其菌劑制備技術(shù)研究

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1、分類號:密級：UDC：學(xué)號：405604812108南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文飼用益生菌的篩選及其菌劑制備技術(shù)研究ScreeningandPhysiologicalFunctionofForageProbioticBacteria鄧耀軍培養(yǎng)單位（院、系）：食品學(xué)院食品科學(xué)與工程系指導(dǎo)教師姓名、職稱：熊濤教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：工學(xué)類學(xué)科專業(yè)名稱：食品科學(xué)論文答辯日期：2015年5月2015年05月30日一、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和

2、致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名（f-寫）:簽字丨-:丨期：wr年以月c〇n二、學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制

3、手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)北京萬方數(shù)據(jù)股份有限公司和中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)，N意按“章程”規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。學(xué)位論文作者簽名（手寫）：文fg$導(dǎo)師簽名（手寫）：簽字F1期：A/r年以月〇州簽字R期：，/$"年0'月〇1円論文題目姓名學(xué)號4巧知辦/刀論文級別博士□碩士a院/系/所專業(yè)4飛魏Email備注：5/公開□保密（向校學(xué)位辦申請獲批準為“保密”，______年_月后公幵)摘要摘要羅伊

4、氏乳桿菌作為一種重要的動物微生態(tài)制劑中的益生菌，其菌體本身及代謝產(chǎn)物能夠抑制仔豬腸道過路菌和病原菌的粘附及生長，因此能夠提高仔豬的免疫力和降低仔豬死亡率，從而大大的改善了養(yǎng)殖行業(yè)的質(zhì)量。本課題是從畜禽糞便中有針對性、目的性地篩選出產(chǎn)酸菌株，且對其進行體外性能評價。主要研究如下：（1）飼用益生菌的篩選。經(jīng)過初篩及耐酸耐膽鹽復(fù)篩，從仔豬糞便中篩選出三株產(chǎn)酸菌株，通過菌體特征、糖發(fā)酵等生理生化實驗以及分子生物學(xué)鑒定，最后確定其為羅伊氏乳桿菌，且其中耐受性最強的為NCU801。（2）NCU801生長曲線繪制。羅伊氏乳桿菌NCU801屬于

5、異型發(fā)酵，能夠利用葡萄糖代謝產(chǎn)生乳酸、乙酸，同時還能夠產(chǎn)生乙醇、二氧化碳等，0-4h、4-16h、16-24h及24h后分別為延滯期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。（3）NCU801的動物胃腸道耐受性能研究。L.reuteriNCU801在pH2.5動物胃液時，菌株D值大于60min；通過模擬動物腸液耐受性實驗，菌體在腸液作用4h后，存活率仍有38.6%。在膽鹽濃度為0.3%的改良MRS培養(yǎng)基中作用524h后，活菌數(shù)下降一個多數(shù)量級，但活菌數(shù)仍有9.7×10CFU/mL。可見，L.reuteriNCU801具有較強抵抗動物胃腸道逆環(huán)境

6、的能力。（4）NCU801的抑菌性能研究。通過對腸道中常見的9種致病菌的抑菌實驗，發(fā)現(xiàn)羅伊氏乳桿菌NCU801的菌體、發(fā)酵液和無菌上清液均具有抑菌性，且發(fā)酵液和發(fā)酵液的無菌上清液的抑菌效果較菌體更強，其中發(fā)酵液和無菌上清液對大腸埃希氏菌抑制作用最強，抑菌圈直徑達18mm以上，由此可以判斷出羅伊氏乳桿菌NCU801的抑菌作用主要依賴于本身的代謝產(chǎn)物。（5）NCU801腸道粘附性能研究。NCU801對Caco-2細胞的粘附，其粘附指數(shù)同菌體濃度、菌體發(fā)酵時間、孵化時間及pH值都有對應(yīng)的關(guān)系；而NCU801對Caco-2細胞粘附指數(shù)最

7、大值達（5.08±0.15）CFU/cell。NCU801活菌、死菌均能在置換、競爭和排斥性的抑制病原菌對Caco-2細胞粘附；其中抑制粘附作用最大的為活菌懸液對大腸桿菌排斥粘附抑制，抑制粘附率達86.8±4.5（%）。（6）NCU801高密度培養(yǎng)條件研究。通過單因素試驗，確定了L.reuteriNCU801最佳碳源、氮源、緩沖鹽、無機鹽離子分別為葡萄糖、牛肉膏和酵母I摘要2+膏、NaAc、Mg；而正交試驗優(yōu)化的培養(yǎng)基配方為：牛肉膏1.5%，酵母膏1.5%，葡萄糖5%，MgSO40.06%，MnSO40.01%，NaCl0.00

8、1%，K2HPO40.2%，檸檬9三銨0.2%，CH3COONa0.3%。菌液濃度達1.3×10CFU/mL。關(guān)鍵詞：羅伊氏乳桿菌；選育；胃腸道耐受性；抑菌性能；粘附性；粘附抑制性IIABSTRACTABSTRACTLactobacillusreuteriiso