黃芪甲苷聯(lián)合5-氮胞苷誘導(dǎo)hucb-mscs分化為心肌樣細(xì)胞并抑制其凋亡

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1、分類號(hào)密級(jí)－？ＵＤＣ６１０學(xué)校代碼１０巧５義孝義拿碩±學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）黃獲甲普聯(lián)合－氮胞普誘導(dǎo)５－ｈＵＣＢＭＳＣ＇。ｓ分化為肌樣細(xì)胞并抑制其調(diào)亡？＇．研究生姓名：謝新林指導(dǎo)教師、職稱：楊云華主任醫(yī)師？＊－．：專業(yè)學(xué)位類別；）（領(lǐng)域）臨床醫(yī)學(xué)（兒科學(xué)研究方向；小兒也血管病所在學(xué)院一臨床學(xué)院：南華大學(xué)第二０—五年五月＠南４義拿－ｈＵＣＢ－ＭＳＣ黃裝甲尊聯(lián)合ｓ氮胞普誘導(dǎo)ｓ分化為肌樣細(xì)胞并抑制其調(diào)亡論文作者簽名：謝新林指導(dǎo)教師簽名：楊云華論文評(píng)閱人１一：羅永妓，主化睽師，南帶大

2、學(xué)附屬第戾院評(píng)閱人２：何少為，副韋件戾師，南化大學(xué)附屬鍋化麟院答辯委員會(huì)主席：李雙杰，郵暢，碩導(dǎo)，湖南省化童民院委員１：奎勞君－－睽院，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附履第蠶員２：楊波一睽院，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華乂舉附屬領(lǐng)－委貴３：一展院唐Ｈ元，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附嵐第委員４一＝殷小成，主任睽師，碩巧，南華大舉附搖錯(cuò)民院二〇－－答辯日期：?zhēng)埬晡澹榷崳娔先A大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈變的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加ｌｔｉ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其化或他證人書(shū)己經(jīng)而發(fā)使

3、表或撰寫(xiě)妊的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明。本人完全意作識(shí)者到簽本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。名：謝新林年０５月２２口南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻橫’（博／碩）±學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成單的位學(xué)位論文。本論文的研究成果巧南華大學(xué)所巧，本論文的研究?jī)?nèi)容不得其它有權(quán)化的名義發(fā)表。本人同意觸華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即；學(xué)校留學(xué)位論義，允許學(xué)位論文被杳閱和借閱；學(xué)校可臥公布學(xué)位論文的全部湖或部南省分有內(nèi)容關(guān)部，可采用復(fù)印、縮印或

4、其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)閨家或論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)ｎ規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入《中國(guó)優(yōu)秀博碩±學(xué)位－享受相關(guān)權(quán)益》，并按《中國(guó)優(yōu)秀博碩上學(xué)位論文全文數(shù)掘庫(kù)出版章程》規(guī)定位論文全文數(shù)據(jù)。同庫(kù)意授權(quán)中國(guó)科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論義收錄到《中國(guó)學(xué)義》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)巧社會(huì)公眾提供倍息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論，解密后適用該巧權(quán)。作者簽＾＊名：謝新林１５年０５月２２日、＾導(dǎo)師簽＾名：楊巖―＞５年０５月２２Ｈ＾黃芪甲苷聯(lián)合5-氮胞苷誘導(dǎo)hUCB-MSCs分化為心肌樣細(xì)胞并抑制其凋亡摘要目的:5-氮胞苷（5-aza）是一種間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分化的有效誘導(dǎo)

5、劑，但存在較大的毒副作用。黃芪甲苷（AST）為黃芪制劑中的主要活性成分，也能誘導(dǎo)MSCs分化。本研究的目的旨在闡明AST聯(lián)合5-aza對(duì)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞（hUCB-MSCs）分化為心肌樣細(xì)胞的影響，并探討其對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法:1.采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法體外分離和培養(yǎng)hUCB-MSCs，流式細(xì)胞術(shù)鑒定hUCB-MSCs免疫表型抗原CD34、CD44和CD29。2.取第3代hUCB-MSCs，分別予培養(yǎng)基（空白對(duì)照組）、5μmol/L5-aza（低劑量5-aza組）、10μmol/L5-aza（高劑量5-aza組）及200mg/LAST+5μmol/L5-aza（AS

6、T+5-aza組）處理4周，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)心肌肌鈣蛋白T（cTnT）、Desmin表達(dá)；通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR、westernblot分別檢測(cè)心房利鈉肽（ANP）mRNA、蛋白表達(dá)；行酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量。3.在hUC-MSCs誘導(dǎo)分化4周后，予高糖（33mmol/L）/葡萄糖氧化酶（2mU/mL）處理12h以誘導(dǎo)心肌樣細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，westernblot檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.hUCB-MSCs表面抗原CD34陰性，CD44、CD29陽(yáng)性。I2.誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生

7、顯著變化；空白對(duì)照組未見(jiàn)cTnT、Desmin表達(dá)，高劑量5-aza組、AST+5-aza組cTnT、Desmin表達(dá)水平較低劑量5-aza組升高（P<0.01），但AST+5-aza組與高劑量5-aza組之間無(wú)區(qū)別（P>0.05）；高劑量5-aza組、AST+5-aza組ANP表達(dá)水平、細(xì)胞內(nèi)cAMP含量顯著高于低劑量5-aza組（P<0.01），但AST+5-aza組上述指標(biāo)與高劑量5-aza組相比，差異無(wú)顯著性（P>0.05）