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《glut9基因啟動子區(qū)痛風易感snp位點功能的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、分類號：R587.1密級：不保密UDC：610學校代碼：11065碩士學位論文GLUT9基因啟動子區(qū)痛風易感SNP位點功能的研究朱雪蓮指導教師李長貴教授學科專業(yè)名稱內(nèi)科學（內(nèi)分泌與代謝?。┱撐拇疝q日期2015年5月31日摘要目的：前期研究發(fā)現(xiàn)人葡萄糖轉運蛋白9(GLUT9)基因啟動子區(qū)SNPrs13124007位點G/C與中國漢族男性的痛風易感性顯著相關。本研究擬進一步開展功能研究探討該SNP是否通過影響GLUT9基因啟動子的活性，進而引起痛風發(fā)生。方法：PCR擴增包含GLUT9基因啟動子區(qū)SNPrs1312400
2、7位點在內(nèi)的DNA片段，構建野生型（pGL3-basic-GLUT9/G）和突變型（pGL3-basic-GLUT9/C）質(zhì)粒，將質(zhì)粒瞬時轉染至293T細胞使其在細胞內(nèi)表達，通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)研究SNPrs13124007G/C對GLUT9啟動子區(qū)激活能力的影響，通過凝膠遷移率（EMSA）實驗觀察兩種等位基因型探針轉錄因子結合情況。結果：重組質(zhì)粒經(jīng)測序鑒定，證明目的片段已成功插入，且序列方向正確，重組質(zhì)粒構建成功。雙熒光素酶報告系統(tǒng)顯示pGL3-basic-GLUT9/C較pGL3-basic-GLUT9/G對
3、啟動子激活能力下降(P?0.05)。EMSA結果顯示rs13124007位點等位基因為C時較等位基因G缺少轉錄因子IRF-1結合位點，且可能致原有轉錄因子結合活性發(fā)生變化或產(chǎn)生新的轉錄因子結合序列。結論：GLUT9基因啟動子區(qū)SNPrs13124007通過影響啟動子的活性進而影響GLUT9基因的表達，這一作用有可能是通過IRF-1實現(xiàn)的，對深入理解中國漢族男性痛風的發(fā)生機制提供理論基礎。碩士研究生：朱雪蓮(內(nèi)分泌與代謝病)指導教師：李長貴教授關鍵詞：痛風；GLUT9；rs13124007AbstractObject
4、ives:PreviousstudieshaveshownthattheGtoCsubstitutionofrs13124007locatedintheputativepromoterregionofglucosetransporter9(GLUT9),issignificantlyassociatedwithgoutsusceptibilityinHanChinesemales.Here,weinvestigatethepotentialmechanismsunderlyingassociationbetween
5、thispolymorphismandgoutrisk.Methods:SpecificfragmentsincorporatingtheGLUT9rs13124007polymorphismwereobtainedbypolymerasechainreaction(PCR),andclonedintoaluciferasereportervectortoconstructthewild(pGL3-basic-GLUT9/G)andmutant(pGL3-basic-GLUT9/C)recombinant.Ther
6、ecombinantweretransienttransfectedinto293Tcellstoexpress.Differencesinpromoteractivitiesweretestedbydual-luciferaseactivityassay.Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)wasalsoperformedtodeterminedifferencesintranscriptionfactorbindingactivitiesbetweenGandCalle
7、les.Results:BysequencedtherecombinantcontainedboththesequenceofpGL3-basicandthatofrs13124007ofhumanGLUT9genepromoter.Thesegmentinsertedwasinthecorrectdirection.Dual-luciferaseactivityassaysshowedsignificantreductionsintranscriptionalefficiencywiththeCcomparedw
8、ithGallele(P?0.05).Furthermore,EMSAdemonstratedthattheCandGalleleshavedifferentaffinitiesforspecifictranscriptionfactors,andsuggeststhattheGtoCsubstitutionofrs13124007causesIRF-1bi
