基于dna分子標(biāo)記的金銀花摻偽鑒定方法研究

《基于dna分子標(biāo)記的金銀花摻偽鑒定方法研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、■－—＾？騎：辛徹＾？、：連心私。，＊．；：乂蓉感伊?。蓿裕桑粒危剩桑危墸眨危桑郑牛遥樱桑裕伲崳姡壗韲冢F(xiàn)代大學(xué)ａ／ＦＯＵＮＤＥＤ９５．ＩＮ１８％？ｍ－？一巧＇．盧Ｉ；－論，；．謙！?。蓿墸保保背檀T±．＾位論文！、１苗１：盛嶺連三領(lǐng)域—－：＾作者姓名＾曼進(jìn)這＾指縣教肺，史清洪教授蘭青闊副研究員？？彎綜名嗎辦甲－ｒ１天壓耐院Ｉｉ―’酵’初賴—；２０１５年３月竹Ｊ．！匿，兒：：１＾＾：聲

2、ｉ扇基于DNA分子標(biāo)記的金銀花摻偽鑒定方法研究AdulterationIdentificationofLonicerajaponicabasedonDNAmolecularmarker學(xué)科專業(yè)：制藥工程研究生：徐石勇指導(dǎo)教師：史清洪教授蘭青闊副研究員天津大學(xué)化工學(xué)院學(xué)院二零一五年三月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的＾研究成果，除了文中特別加＾＾＞標(biāo)注和致謝之處外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得天津大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或

3、證書而使用過的材料一。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。口■＾學(xué)位論文作者簽名：簽字円期；廣年ｒ月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津欠學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)天津大學(xué)可將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印。、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編Ｗ供查閱和借閱同意學(xué)校向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)說明）學(xué)位論文作者簽名劇幣簽名；

4、＂＇＾１＞｜：年月》日簽字鬥期：年ｒ月簽字円期摘要金銀花為忍冬科植物忍冬（LonicerajaponicaThunb.）的干燥花蕾或初開的花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱的功效，為常用的大宗中藥材。近年來金銀花的開發(fā)利用獲得突破性進(jìn)展，需求量急劇增大，市場缺口比較大。有些不法商家將價格便宜近十倍的山銀花（LoniceraeFlos）當(dāng)做金銀花銷售和使用。常用的金銀花鑒定方法包括基于形態(tài)學(xué)標(biāo)記的傳統(tǒng)鑒定技術(shù)、基于藥效成分的現(xiàn)代理化鑒定技術(shù)以及隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)（Randomamplifiedpolymorp

5、hicDNA，RAPD）和微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記（inter-simplesequencerepeat，ISSR）等分子標(biāo)記鑒定技術(shù)。但其鑒定技術(shù)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性還不能完全滿足現(xiàn)代中藥材及中藥品質(zhì)量控制的要求。為保證臨床療效安全和消費(fèi)者利益，亟需建立科學(xué)性強(qiáng)、精準(zhǔn)的金銀花摻偽鑒別方法。本文以大宗藥材金銀花為材料，基于EST-SSR、EST-SNP標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合高分辨率熔解曲線和焦磷酸測序分析技術(shù)，建立快速、高通量、自動化的金銀花摻偽鑒別方法，為規(guī)范、監(jiān)管藥材市場提供技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下：1、構(gòu)建了基于E

6、xcel格式的金銀花SSR指紋圖譜，主要包括3對引物在6個供試材料中擴(kuò)增到的18條多態(tài)性條帶信息，應(yīng)用該指紋圖譜對金銀花及其變種的遺傳多樣性進(jìn)行分析，結(jié)果表明金銀花與山銀花之間遺傳距離較遠(yuǎn)，僅為0.28。應(yīng)用該指紋圖譜對87個市售金銀花樣本進(jìn)行分析，能夠區(qū)分出河北、山東、河南等地的金銀花品種。2、基于SNP標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合高分辨率熔解曲線分析技術(shù)，建立快速、高通量的金銀花真?zhèn)螜z測方法。利用高分辨率溶解曲線技術(shù)對金銀花和山銀花的標(biāo)志性SNP位點(diǎn)進(jìn)行分析。該鑒別方法可用于金銀花藥材的真?zhèn)卧u價，在1-2h之內(nèi)即可完成

7、金銀花真?zhèn)蔚蔫b定工作，具有快速、低成本、操作方便和閉管檢測防止污染等優(yōu)勢。3、基于SNP標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合焦磷酸測序分型分析技術(shù)，建立精準(zhǔn)、高通量的金銀花摻偽量檢測方法。利用焦磷酸測序技術(shù)對金銀花及其偽品山銀花的標(biāo)志性SNP位點(diǎn)進(jìn)行定量分析，已達(dá)到獲得中成藥、保健品、食品中金銀花成分摻偽結(jié)果。本發(fā)明的檢測方法在3h之內(nèi)即可完成金銀花成分摻偽鑒定工作，具有簡單易行、靈敏度高、快速、費(fèi)用低和便于推廣等特點(diǎn)，為現(xiàn)代中藥摻偽鑒定開辟了廣闊的前景。關(guān)鍵詞：金銀花；SSR標(biāo)記；SNP標(biāo)記；摻偽鑒定ABSTRACTLonice

8、rajaponicaThunbiswidelyusedintraditionalChinesemedicinesforitsheat-clearing,detoxifying,andanti-inflammatoryproperties,whichcomesfromL.hypoglaucaMiq.,L.confusa(Sweet)DC.,L.macranthoidesHand.-Mazz.,andL