交配與未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白質(zhì)組學(xué)的初步分析

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1、第26卷第4期,2013年10月Vol.26No.4,Oct.2013寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版）JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE)首屆中國(guó)高校優(yōu)秀科技期刊獎(jiǎng)?wù)憬?yōu)秀科技期刊一等獎(jiǎng)交配與未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白質(zhì)組學(xué)的初步分析徐洲,母昌考,李榮華,宋微微,王春琳*（寧波大學(xué)海洋學(xué)院,浙江寧波315211）摘要:采用雙向電泳和基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF)研究三疣梭子蟹交配與未交配雌性個(gè)體肝胰腺蛋白質(zhì)表達(dá).使用PDQuest軟件分析雙向電泳

2、凝膠圖像,結(jié)果顯示:交配組和未交配組凝膠圖像上分別能檢測(cè)到(400±25)和(530±16)個(gè)蛋白點(diǎn),其中共有15個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)量有顯著性差異(P＜0.05).與未交配組相比,交配組三疣梭子蟹肝胰腺中6個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)量顯著性上升.經(jīng)質(zhì)譜鑒定為:磷酸丙糖異構(gòu)酶、磷酸丙酮酸水合酶、過(guò)氧化氫酶、δ-谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、ATP合酶α-亞基和胰凝乳蛋白酶.此外,交配組三疣梭子蟹肝胰腺中9個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)量顯著性下降.經(jīng)質(zhì)譜鑒定為:延伸因子2、長(zhǎng)鏈?；鵆oA脫氫酶、假血藍(lán)蛋白1、假血藍(lán)蛋白2、異檸檬酸脫氫酶、線(xiàn)粒體乙

3、醛脫氫酶X、轉(zhuǎn)酮醇酶、血藍(lán)蛋白α-亞基和腺苷高半胱氨酸酶A.該結(jié)果可為揭示三疣梭子蟹卵巢發(fā)育機(jī)理提供重要參考.關(guān)鍵詞:三疣梭子蟹;蛋白質(zhì)組學(xué);交配;肝胰腺中圖分類(lèi)號(hào):Q513文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1001-5132（2013）04-0001-06三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus),隸屬于甲殼綱、十足目、梭子蟹科,廣泛分布于中國(guó),日本和韓國(guó)沿海地區(qū),是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蟹類(lèi),[1]所周知,肝胰腺是甲殼動(dòng)物的重要器官,在甲殼類(lèi)動(dòng)物生長(zhǎng)、免疫反應(yīng)和代謝等多種生理過(guò)程中發(fā)揮[2

4、]響卵巢的發(fā)育.例如,普通濱蟹(Carcinusmaenas)維甲酸X受體會(huì)刺激卵巢的發(fā)育,而中華絨螯蟹(Eriocheirsinesis)硒蛋白M在個(gè)體快速發(fā)育期參與蛋白質(zhì)和脂肪含量變化會(huì)發(fā)生規(guī)律性變化.雖然以往學(xué)者對(duì)三疣梭子蟹肝胰腺蛋白質(zhì)含量在卵巢發(fā)育過(guò)程中的變化趨勢(shì)已有報(bào)道,但研究方法大多是對(duì)肝胰腺進(jìn)行組織切片和生化成分測(cè)定,而沒(méi)有蛋白表達(dá)水平研究的報(bào)道.筆者旨在探究三疣梭子蟹卵巢發(fā)育過(guò)程中,交配和未交配三疣梭子蟹肝胰腺中蛋白質(zhì)表達(dá)差異情況,并對(duì)產(chǎn)生差異的原因進(jìn)行分析.對(duì)交配與未交配雌性三疣梭

5、子蟹肝胰腺開(kāi)展差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究有助于深入了解肝胰腺的功能.[3]蟹卵巢發(fā)育中表達(dá)量變化和所發(fā)揮主要功能的文1材料與方法獻(xiàn)還未見(jiàn)報(bào)道.有學(xué)者指出三疣梭子蟹生殖蛻殼后沒(méi)有交配的個(gè)體卵巢會(huì)停止發(fā)育,因?yàn)榻慌涫钦T導(dǎo)濾泡細(xì)[4][5]指出某些三疣梭子蟹卵巢發(fā)育過(guò)程中,肝胰腺中1.1三疣梭子蟹交配及樣品采集三疣梭子蟹飼養(yǎng)于浙江寧波鑫億鮮活水產(chǎn)有限公司,隨機(jī)挑選健康成年雄性和雌性三疣梭子蟹各30只,每只體重約為180g.雄性和雌性分別飼養(yǎng)于塑料飼養(yǎng)筐內(nèi)(40cm×40cm×40cm).于收稿日期:2013?

6、03?25.寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版）網(wǎng)址:http://journallg.nbu.edu.cn/基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金（41106123）;浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大專(zhuān)項(xiàng)（2012C12907-3）;浙江省海水養(yǎng)殖重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2010R50025-08）;寧波市海洋與漁業(yè)專(zhuān)項(xiàng)（2011-1-7）;浙江省教育廳科研項(xiàng)目（Z201121258）;寧波市農(nóng)業(yè)科技專(zhuān)項(xiàng)（201015）;寧波市海洋蟹類(lèi)產(chǎn)業(yè)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2011B81003）.第一作者:徐洲（1989－）,男,江西九江人,在讀碩

7、士研究生,主要研究方向:遺傳育種與種質(zhì)保護(hù).E-mail:xuzhou9559@163.com*通信作者:王春琳（1965－）,男,浙江臺(tái)州人,博導(dǎo)/教授,主要研究方向:水產(chǎn)養(yǎng)殖.E-mail:wangchunlin@nbu.edu.cn在全球海水養(yǎng)殖業(yè)也占據(jù)了極其重要的地位.眾著重要作用.其中,肝胰腺某些蛋白質(zhì)功能會(huì)影生殖調(diào)控.但關(guān)于肝胰腺蛋白質(zhì)在雌性三疣梭子胞向卵母細(xì)胞遷移和卵黃發(fā)生的前提.吳旭干等2寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版）20132011年9月將雌蟹和雄蟹各30只以1:1的數(shù)量比例放入同一飼養(yǎng)

8、筐內(nèi),共30對(duì).使用塑料柵欄將其中15對(duì)雌蟹和雄蟹分隔開(kāi),阻止其抱對(duì)和交配,視為未交配組.交配組雌蟹和雄蟹不做上述處理.觀察發(fā)現(xiàn),交配組雌蟹生殖蛻殼后,雌雄蟹能抱對(duì)并交尾,交尾結(jié)束后可觀察到納精囊中精莢呈桃紅色,并隨著雌蟹甲殼硬化,精莢逐漸縮小并褪色.而未交配組內(nèi)的三疣梭子蟹不交配,納精囊中無(wú)精莢.交配完成后,將2組共30只雌性三疣梭子蟹置于相同環(huán)境下飼養(yǎng),經(jīng)過(guò)6個(gè)月(2011年9月到2012年3月)至第一次卵巢發(fā)育期后,解剖分離出交配組15只雌蟹肝胰腺