產(chǎn)琥珀酸放線桿菌發(fā)酵生產(chǎn)琥珀酸的研究進(jìn)展

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)中國(guó)生物工程雜志ChinaBiotechnology,2008,28(12):102~106產(chǎn)琥珀酸放線桿菌發(fā)酵生產(chǎn)琥珀酸的研究進(jìn)展張玉秀h‘(1中國(guó)礦業(yè)大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院生物工程系張?jiān)苿?李強(qiáng)2北京1000832中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所北京100080)摘要近年來(lái),因瘤胃微生物產(chǎn)琥珀酸放線桿菌Actinobacillussuccinogenes具有高的琥珀酸產(chǎn)量,并能夠利用多種碳源進(jìn)行發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn),在利用發(fā)酵法生產(chǎn)琥珀酸領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景和商業(yè)化價(jià)值,因而其代謝途徑和發(fā)酵工藝等基礎(chǔ)研究

2、成為國(guó)內(nèi)外研發(fā)的熱點(diǎn)。近年來(lái),人們?cè)诋a(chǎn)琥珀酸放線桿菌的代謝途徑、琥珀酸發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型、新型經(jīng)濟(jì)培養(yǎng)基以及高產(chǎn)菌株選育等方面的研究取得了很大進(jìn)展,對(duì)研發(fā)琥珀酸發(fā)酵工藝、降低生產(chǎn)成本和節(jié)能減耗等具有重要的理論意義。關(guān)鍵詞琥珀酸發(fā)酵產(chǎn)琥珀酸放線桿菌中圖分類號(hào)Q815琥珀酸,學(xué)名丁二酸,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi),是生物進(jìn)行TCA循環(huán)的中間產(chǎn)物之一。它是一種重要的有機(jī)合成中間體,主要應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、生物降解甥料、表面活性劑、洗滌劑、綠色溶劑和動(dòng)植物生長(zhǎng)刺激物等領(lǐng)域?。人們主要是利用化學(xué)合成的方法,從丁烷通

3、過(guò)順式丁烯二酐生產(chǎn)琥珀酸。該方法以石油為原料,生產(chǎn)成本高,環(huán)境污染嚴(yán)重,從而限制了琥珀酸的廣泛應(yīng)用。因此,人們開(kāi)始將目標(biāo)轉(zhuǎn)向通過(guò)生物發(fā)酵法來(lái)生產(chǎn)琥珀酸。與傳統(tǒng)的化學(xué)合成法相比,發(fā)酵法具有成本低、環(huán)境效益好等優(yōu)點(diǎn)。目前,通過(guò)發(fā)酵法生產(chǎn)得到的琥珀酸,其價(jià)格大約為0.55一1.10$/kg口1。另外,據(jù)Bio-amber公司稱,琥珀酸具有25億歐元的市場(chǎng),且生物法生產(chǎn)琥珀酸能夠與石化的方法相競(jìng)爭(zhēng),并計(jì)劃于2011前利用植物作為原料進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)琥珀酸(http://www.france-chimie.com)

4、。目前,人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種微生物可以通過(guò)發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)琥珀酸,其中研究主要集中在大腸桿菌(Escherichiacoil)p。,Mannheimiasucciniciproducens【4J,產(chǎn)琥珀酸厭氧螺菌(Anaerobiospirillumsucciniciproducens)”1和產(chǎn)琥珀酸放線桿菌(Actinobacillussuccinogenes)№.7J。在眾多的產(chǎn)琥珀酸微生物中,瘤胃微生物產(chǎn)琥珀酸放線桿菌收稿日期:2008-07-22慘同日期:2008-08.18·國(guó)家“863”計(jì)劃(200

5、7AA021404、2006AAl02407)資助項(xiàng)目··電子信箱:zlIn鯽Ixiu@cumtb.edu.∞Actinobacillussuccinogenes能夠利用多種糖類進(jìn)行發(fā)酵,并且可以耐受葡萄糖和琥珀酸的濃度分別高達(dá)1589/L和1049/L¨o;同時(shí),該菌以其高產(chǎn)量、高耐受性等優(yōu)勢(shì),成為最具發(fā)展前景的琥珀酸產(chǎn)生菌之一。近幾年來(lái),人們對(duì)ActinobaciUussuccinogenes的研究中取得了許多進(jìn)展,如首次利用13C原子標(biāo)記在體內(nèi)測(cè)定了琥舛£l酸代謝途徑,并證實(shí)有草酰乙酸、蘋(píng)果酸到

6、丙酮酸代謝途徑的存在№1;建立了琥珀酸發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型,量化了菌體生長(zhǎng)、底物消耗以及產(chǎn)物形成之間的動(dòng)力學(xué)關(guān)系哺'91;另外,一些新型經(jīng)濟(jì)培養(yǎng)基的發(fā)展及菌種的篩選也有不少報(bào)道。因此,本文主要綜述產(chǎn)琥珀酸放線桿菌Actinobacilluasuccinogenes的代謝途徑、琥珀酸發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型、廉價(jià)新型培養(yǎng)基以及菌種選育等方面的研究進(jìn)展。1產(chǎn)琥珀酸的代謝途徑1.1關(guān)鍵酶及重要節(jié)點(diǎn)通過(guò)生物轉(zhuǎn)化法得到的琥珀酸是高度還原產(chǎn)物,主要是將糖酵解過(guò)程中得到的磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)經(jīng)由TCA循環(huán)的還原支路,通過(guò)一步

7、CO:固定和兩步還原反應(yīng),依次生成草酰乙酸、蘋(píng)果酸、延胡索酸,最后經(jīng)延胡索酸還原酶催化生成琥珀酸。該過(guò)程涉及到的關(guān)鍵酶主要有磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)、蘋(píng)果酸脫氫酶、延胡索酸酶和富馬酸還原酶。萬(wàn)方數(shù)據(jù)2008,28(12)張玉秀等:產(chǎn)琥珀酸放線桿菌發(fā)酵生產(chǎn)琥珀酸的研究進(jìn)展103廠一一目it矧一豪酸

8、;量i悖ADH/\、≮l

9、影

10、巴西型1.2NADPH的產(chǎn)生McKin

11、ay等㈧研究表明磷酸戊糖氧化途徑可以產(chǎn)生約20%的NADPH,但是并不能滿足細(xì)胞生長(zhǎng)的需要。其代謝過(guò)程中所需的NADPH主要是通

12、過(guò)轉(zhuǎn)氫酶將丙酮酸脫氫酶和qI酸脫氫酶催化過(guò)程中產(chǎn)牛的NADH轉(zhuǎn)化成NADPH,從而為細(xì)胞生長(zhǎng)和琥珀酸的形成提供更多的還原力。在大腸桿菌中,可以通過(guò)構(gòu)造乙醛酸途徑獲得更多的NADH,從而提高琥珀酸產(chǎn)量¨“。但這項(xiàng)研究表明,在產(chǎn)琥珀酸放線桿菌代謝過(guò)程中,乙醛酸途徑對(duì)琥珀酸的產(chǎn)生所起的作用很小,可以忽略不計(jì)。除此之外,蘋(píng)果酸脫氫酶在催化過(guò)程中,也可以產(chǎn)生少量NADPH。1.3外源物質(zhì)對(duì)代謝流分配的影響CO:和H:對(duì)琥珀酸的代謝有著重要的作用,直接影響琥珀酸的產(chǎn)

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