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《桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經的物質基礎及作用機理研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、南京中醫(yī)藥大學博士學位論文桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經的物質基礎及作用機理研究姓名：王振中申請學位級別：博士專業(yè)：中藥學指導教師：段金廒20090601摘要桂枝茯苓膠囊由桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮組成，處方源于張仲景《金匱要略》桂枝茯苓丸，為治療婦科血瘀證的經典名方。具有活血化瘀、緩消癥塊、去瘀生新、理氣止痛之功效，臨床用于治療子宮肌瘤、慢性盆腔炎、痛經、卵巢囊腫等婦科疾病，療效確切，但其物質基礎及作用機制研究相對較少。本研究試圖通過化學分離結合效應評價的方式，采用從整體動物到細胞及分子的多種模型，從不同角度闡釋桂枝茯苓膠囊治
2、療原發(fā)性痛經的物質基礎及作用機制。一、桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經的物質基礎研究1．桂枝茯苓膠囊提取與各部位的分離本研究對膠囊內容物進行提取，不同極性溶劑萃取分離及大孔樹脂吸附梯度洗脫兩種分離方案，將全方分為揮發(fā)油部位、石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位、水提部位；大孔樹脂水洗脫部位、20％乙醇洗脫部位、40％乙醇洗脫部位、60％乙醇沈脫部位、95％乙醇洗脫部位，并針對各部位成分的特點建立了相應的指紋圖譜。2．桂枝茯苓膠囊不同分離部位活性評價本研究通過小鼠離體子宮收縮模型，對桂枝茯苓膠囊各部位樣品進行了活性評價。結果
3、顯示：揮發(fā)油部位，乙酸乙酯萃取部位，大孔樹脂40％乙醇洗脫部位，60％乙醇洗脫部位均表現(xiàn)出抑制活性。卵巢顆粒細胞增殖模型結果顯示：正丁醇部位及大孔樹脂60％乙醇洗脫部位均具有顯著的促進大鼠卵巢顆粒細胞增殖的作用。巨噬細胞釋放NO模型結果顯示：揮發(fā)油及大孔樹脂60％乙醇洗脫部位能明顯抑制腹腔巨噬細胞分泌NO。3．桂枝茯苓膠囊活性部位的成分分析效應評價研究結果表明，桂枝茯苓膠囊揮發(fā)性部位，大孔樹脂40％乙醇洗脫部位、60％乙醇洗脫部位均存在效應物質，因此對這些有效部位進行了進一步化學成分分析鑒定。GC．MS分析結果表明：揮發(fā)油部位主
4、要成分為桂皮醛，肉桂酸，丹皮酚。LC．MS分析大孔樹脂40％乙醇洗脫部位、60％乙醇洗脫部位結果表明：其主要成分為沒食子酸、l，2，3，4，6-0．五沒食子酰葡萄糖，苦杏仁苷，芍藥苷，芍藥內酯苷，芍藥新苷等。4．效應部位中各成分的活性驗證根據(jù)上述研究結果，對已鑒定的化合物進行了活性驗證。證實桂皮醛、芍藥苷等具有抑Nd,鼠離體子宮原發(fā)性痛經模型收縮的活性；沒食子酸、芍藥苷、肉桂酸、桂皮醛、苦杏仁苷、苯甲酸能明顯抑制卵巢顆粒細胞增殖，1，2，3，4，6．O．沒食子酰葡萄糖能明顯促進卵巢顆粒細胞增殖：丹皮酚、芍藥苷、芍藥新苷、苦杏仁苷
5、、苯甲酸能明顯抑制大鼠腹腔巨噬細胞過度分泌NO。二、桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經的機制研究1．桂皮醛抑制小鼠離體子宮痛經模型收縮的機制研究本研究通過考察桂皮醛對各種子宮平滑肌激動劑及KCI誘導的子宮平滑肌的影響，初步確定了其作用機制是通過抑制細胞夕l-Ca2+內流及細胞內Ca2+庫的釋放，而對于去極化引起的細胞；,l,Ca2+內流無明顯影響；同時應用熒光酶標儀考察了桂皮醛對平滑肌氧化應激產生的痙攣的影響，結果顯示桂皮醛能部分拮抗并抑制細胞內Ca2+濃度提高。2．桂皮醛、芍藥苷對凝血酶誘導子宮平滑肌細胞增生的影響本研究通過考察桂皮醛
6、、芍藥苷對凝血酶誘導子宮平滑肌細胞增生的影響，發(fā)現(xiàn)桂皮醛、芍藥苷具有明顯抑制凝血酶誘導的平滑肌增生作用。3．桂皮醛、芍藥苷對子宮平滑肌損傷的保護作用本研究建立了子宮平滑肌的氧化損傷及低溫損傷模型，考察桂皮醛、芍藥苷對損傷平滑肌增殖的影響。結果發(fā)現(xiàn)桂皮醛、芍藥苷能顯著促進平滑肌增殖并減少活性氧誘導的平滑肌細胞凋亡。4．有效部位中不同成分配伍對活性的影響本研究以桂皮醛、芍藥苷為主要成分，考察它們與其他成分配伍后對活性影響。結果顯示：芍藥苷能提高桂皮醛抑制小鼠離體子宮收縮效應，苯甲酰芍藥苷能明顯提高芍藥苷抑制小鼠離體子宮收縮效應，顯示
7、具協(xié)同作用。三、桂枝茯苓膠囊效應成分的藥代動力學研究根據(jù)以上研究結果及已有實驗基礎，選擇建立了苦杏仁苷、芍藥內酯苷、芍藥苷的HPLC．MS／MS測定方法，并對其在比格犬體內的藥物代謝特征進行了研究。結果顯示，三者在體內的代謝均可用開放二室模型來描述，不同給藥劑量下苦杏仁苷在比格犬體內的平均半衰期分別為2．43h，1．32h，芍藥內酯苷的平均半衰期分別為6．16h，5．91h，芍藥苷的平均半衰期分別為4．33h，3．62h，提示苦杏仁苷在體內消除較快，平均滯留時間較短，芍藥內酯苷與芍藥苷消除速率中在盤守。關鍵詞：桂枝茯苓膠囊；原發(fā)
8、性痛經；生物效應；物質基礎；作用機制；藥代動力學ABSTRACTGuizlli·-Fulin·-Capsuleisonerepresentativeofthefamousprescriptionsderivedfrom”JinguiYaolue”(”Synops
