鐵過載催化的氧化應(yīng)激對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制

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1、分類號(hào)：R5513密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼學(xué)號(hào)學(xué)科門類又肄眚科矢垮d口—Ⅲa衛(wèi)耍Ⅱ正瑪匹田E匾歪Ⅱ面碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：鐵過載催化的氧化應(yīng)激對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制TITLEEffectandmechanismofiron-catalyzedoxidativestressonmesenchymalstemcells一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：盧文藝指導(dǎo)教師：趙明峰導(dǎo)師組成員：李玉明鄧琦天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年

2、五月2坼=酣學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：差墊日期：≯哆年j月≯日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制

3、手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密口，在——年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密團(tuán)。(請(qǐng)?jiān)谙鄬?duì)應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：主翅。日期：．)。哆年j月)-日日期：j。心戽j月文13天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文．中文摘要目的：探討鐵過載催化的氧化應(yīng)激——活性氧物質(zhì)(ROS)生成對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM．MSC)及臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞(UC—MSC)的細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、支持造血細(xì)胞集落形成能力的影響及其作用機(jī)制。方法：1．

4、體外培養(yǎng)BM．MSC及UC．MSC，向培養(yǎng)液內(nèi)加入枸櫞酸鐵銨(FAG)建立體外鐵過載模型，并通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)不穩(wěn)定鐵池(LIP)的水平驗(yàn)證該模型是否成功。2．分別采用群體倍增時(shí)間(DT)檢測(cè)鐵過載BM—MSC、UC．MSC的細(xì)胞增殖能力，碘化丙啶(PI)染色方法檢測(cè)細(xì)胞周期，AnnexinV—PI雙標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，用共培養(yǎng)方法檢測(cè)MSC的造血支持能力。3．采用2’，7’一二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFHoDA)探針法檢測(cè)鐵過載前后細(xì)胞內(nèi)ROS水平，并進(jìn)一步通過Westernblot檢測(cè)ROS相關(guān)信號(hào)因子磷酸

5、化p38絲裂原活化蛋白激酶(P—p38MAPK)、p38MAPK、蛋白激酶B(AKT)、p53蛋白的表達(dá)情況，并應(yīng)用鐵鰲合劑去鐵胺(DFO)，抗氧化劑N．乙酰半胱氨酸(NAC)后檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果：1．用貼壁法培養(yǎng)BM．MSC，三代后細(xì)胞形態(tài)均一一致，呈成纖維漩渦狀貼壁生長(zhǎng)，且純度較高。當(dāng)給予4009mol／LFAC處理BM．MSC24h后，加鐵組BM-MSC的LIP水平明顯高于對(duì)照組(P

6、別為(35．28+2．64)，(43．20-士3．12)，(48．96+3．36)h，均明顯長(zhǎng)于對(duì)照組(28．80-士1．25)h，同時(shí)加鐵組BM．MSC的凋亡率(3．51+1．17)％也明顯高于對(duì)照組(0．66+0．62)％(均P<0．05)。2．相比對(duì)照組而言，加鐵組BM．MSC細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯高于對(duì)照組，且ROS的水平隨著FAC濃度的增加而增加，在4001Jmol／L濃度下達(dá)到最高(P

7、、p53蛋白的表達(dá)明顯增高，而AKT的表達(dá)無明顯差異。3．當(dāng)給予4009mol／L的FAC處理UC．MSC12h后，加鐵組的LIP明顯高于天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)照組，同時(shí)加鐵組細(xì)胞的群體倍增時(shí)間亦明顯長(zhǎng)于對(duì)照組(P<0．05)，但傳代次數(shù)增加2代后兩組之間無明顯差異(P>0．05)；加鐵組UC-MSC出現(xiàn)明顯的G0／G1期阻滯，且其凋亡率(12．75+0．32％)明顯高于對(duì)照組(3．63+0．80％)(’P<0．05)；加鐵組UC-MSC與臍血單個(gè)核細(xì)胞(MNC)分別共培養(yǎng)一周和二周時(shí)，其支持MNC形

8、成造血集落的能力均明顯低于對(duì)照組。4．加鐵組UC—MSC內(nèi)ROS水平明顯高于對(duì)照組，且ROS的水平呈時(shí)間與濃度依賴性，在400p,mol／LFAC濃度下作用12h達(dá)到最高值：且通過檢測(cè)ROS相關(guān)的信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)，加鐵組UC—MSC的P—p38MAPK、p53蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，當(dāng)給予DFO、NAC處理后，UC—MSC細(xì)胞內(nèi)ROS水平及其相關(guān)信號(hào)通路可被抑制。結(jié)論：1．鐵過載可抑制BM—MSC及UC．MSC的增殖能力、引起