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1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：200501071miRNAs對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響專業(yè)年級(jí)：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2005級(jí)姓名：于鵬導(dǎo)，師：翁習(xí)生教授臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)骨科教研室完成日期：2013年6月1獨(dú)創(chuàng)性聲明IIIIlUlIIIIIlY2380947本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示
2、謝．]￡思o(jì)、、學(xué)位敝作者簽名：寸簽字日期：了功／鄉(xiāng)年／月／驢日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解j匕立跡塑醫(yī)堂瞳有關(guān)保存、使用學(xué)位論文的管理辦法。有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)j量塞跡塑醫(yī)堂院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：)房年式鷴門陶’《)B
3、寥日導(dǎo)師簽名：似膨亥簽字日期：勁，鄉(xiāng)年刃日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：北京協(xié)和醫(yī)院電話
4、：13331074881通訊地址：北京市東城區(qū)東單北大街帥府園壹號(hào)北京協(xié)和醫(yī)院骨科郵編：10073023目錄中文摘要????????????????????????????????????。5MIRNAS對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響?????????????????????．9前言????????????????????????????????????9實(shí)驗(yàn)一人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及糖皮質(zhì)激素調(diào)控的MIRNA的篩選???．兒第一部分人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代??????????????????111．1．1材料??
5、?????????????????????????????????一111．1．2方法???????????????????????????????????一121．1．3結(jié)果???????????????????????????????????．．121．1．4．討淪????????????????????????????????????????????????13第¨二部分利用生物信息學(xué)方法對(duì)BMSC成脂分化相關(guān)MIRNAS的篩選???????????131．2．3結(jié)果與討論????????????????????????????????
6、?19實(shí)驗(yàn)二BMSC的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及油紅O、茜素紅、¨型膠原染色??????????????212．1．1BMSC的轉(zhuǎn)染????????????????????????????????一222．2油紅O染色評(píng)價(jià)MIRNA對(duì)BMSC成脂分化的影響??????????????????242．3茜素紅染色評(píng)價(jià)MIRNA對(duì)BMSC成骨分化的影響??????????????????242．4II型膠原染色評(píng)價(jià)MIRNA對(duì)BMSC成脂分化的影響?????????????????．252．5實(shí)驗(yàn)結(jié)果???????????????????????????????
7、????272．6討論?????????????????????????????????????????????????27實(shí)驗(yàn)三HAS·MIR一1303的功能研究——全基因組芯片對(duì)MIR一1303靶基因及作用通路的識(shí)別?．．283．1材料與方法??????????????????????????????????293．2結(jié)果?????????????????????????????????????37文獻(xiàn)回顧????????????????????????????????????554中文摘要研究背景miRNA(microRNA)是一類短小
8、的非編碼單鏈小分子RNA，通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)對(duì)基因表達(dá)發(fā)揮著重要調(diào)控作用。多項(xiàng)研究表明，miRNA在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、分泌、遷移、惡性轉(zhuǎn)化等細(xì)胞功能方面存在重要調(diào)控功能，在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、組織器官分化、疾病的發(fā)生發(fā)展等復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程中亦扮演著重要角色。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)是一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞，可以分化為多種中胚層細(xì)胞及數(shù)種非中胚層細(xì)胞。已經(jīng)有很多研究證明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化異常在諸如股骨頭壞死、骨質(zhì)疏松等疾病當(dāng)中扮演著重要角色。miRNA通過(guò)對(duì)大量基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化方向產(chǎn)生重要的調(diào)
9、控作用。本研究擬在本課題組前期研究的基礎(chǔ)上對(duì)此前篩選出的miRNAs進(jìn)行功能驗(yàn)證，明確其對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化方向的影響。研究目的1．復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代BMSC，用生
