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1、博士學位論文慢病毒介導的RNA干擾沉默Tiaml基因?qū)δ懝馨┥飳W行為的影響EFFECTOFLENTIVIRUS．MEDIATEDRNAITIAMlGENESILENCEoNBIOLOGICALBEHAⅥORSOFCHoLANGIoCARCINOMA作者姓學科專學院(系、指導教名：成偉業(yè)：普通外科學所)：湘雅三醫(yī)院師：陳道瑾教授論文答辯日期窶二：：!三：繆答辯委員會主席中南大學二。一二年十二月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地
2、方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：日期：2蘭年二月蘭日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權(quán)中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，
3、并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。懶名：避新簽名降博士學位論文中文摘要慢病毒介導的RNA干擾沉默Tiaml基因?qū)δ懝馨┥飳W行為的影響摘要膽管癌是最常見的一類膽道惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率逐年增加。膽管癌因為其特殊的解剖位置使得大多數(shù)患者在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)臨近晚期，喪失了根治手術的機會，因此膽管癌的手術切除率和5年生存率一直不讓人滿意。膽管癌對放化療不敏感，其他一些非手術療法也難以取得理想效果。目前仍然缺乏早期發(fā)現(xiàn)膽管癌的有效辦法和綜合治療膽管癌的理想方案。加深對膽管癌生物學特性的了解，探尋膽管癌發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在機制，尋求有效
4、的早期診斷和治療方法，對于提高膽管癌的療效，改善膽管癌患者預后具有積極意義。T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導因子l(Tlymphomainvasion觚dmetastasisi11ducingf．a(chǎn)Ctorl，Ti鋤1)被認為是一種原癌基因，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關。Ti鋤1基因通過對細胞骨架的調(diào)節(jié)作用、誘導膜皺褶、調(diào)節(jié)粘附分子的親和力等一系列作用，發(fā)揮促進腫瘤細胞增殖和遷移的功能。Ti鋤l在淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌和肺癌等多種腫瘤組織及腫瘤細胞中高表達，其表達水平與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關。膽管癌最重要的生物學行為表
5、現(xiàn)在順膽管的侵襲和膽管周邊組織、淋巴結(jié)及遠處組織的轉(zhuǎn)移。盡管Ti鋤1基因在多種腫瘤中的表達情況及其與各種腫瘤關系已經(jīng)有學者闡述，但Ti鋤1基因在膽管癌的表達、功能及其機制國內(nèi)外尚未見報道。因此，本研究結(jié)合臨床資料分析、RNA干擾沉默基因及體內(nèi)外實驗等多種實驗方法，從人群、分子、細胞、動物水平觀察Ti鋤1基因在膽管癌中的作用，探討其機制，為膽管癌的診斷和治療提供新的基因靶點。本研究綱要：第一章：觀察Ti鋤1基因在人膽管癌組織和良性膽管組織中的表達差異，探討其表達水平和腫瘤分化程度、侵襲轉(zhuǎn)移能力之間的關系；第二章：構(gòu)建靶向
6、干擾Ti鋤1基因表達的慢病毒載體，確認干擾效果后滴度測試，備下一步功能實驗；第三章：使用特異性靶向干擾Ti鋤1基因表達的慢病毒載體作用膽管癌細胞后，觀察膽管癌細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的改變；博士學位論文中文摘要第四章：建立穩(wěn)定干擾Ti鋤1基因的裸鼠種植瘤模型，觀察Ti鋤1基因沉默后裸鼠種植瘤生物學行為改變。第一章Ti鋤1在人膽管癌組織及細胞系中的表達及其意義目的：研究Ti鋤1基因在人膽管癌組織和良性膽管組織中的表達特點，分析Ti鋤1基因表達與腫瘤分化程度、侵襲轉(zhuǎn)移能力之間的關系，觀察Ti舭11基因在人膽管癌細胞株的表達情
7、況。方法：應用免疫組化法檢測83例膽管癌組織和25例良性膽管組織Ti鋤1表達情況，收集膽管癌患者臨床資料，分析Ti鋤1基因表達與膽管癌患者臨床病理特征之間的關系，Real．tiIIlePCR檢測入膽管癌細胞系QBC939和I國E中Tianll的表達水平。結(jié)果：膽管癌組織中的Ti鋤1蛋白表達陽性率明顯高于良性膽管組織(PO．05)。Ti鋤1mRNA在QBC939和RBE細胞
8、中均有表達，在RBE細胞中的表達較高。結(jié)論：(1)Ti鋤l在膽管癌組織中表達明顯升高，并隨膽管癌惡性程度增加而升高；(2)Ti鋤1在RBE細胞中表達較高，選擇I也B細胞進行后續(xù)實驗。第二章Ti鋤l基因RNA干擾慢病毒載體制備、包裝與病毒滴度測定檢測目的：篩選有效的Ti鋤1．siI斟A序列，構(gòu)建重組慢病毒Ti鋤1．shImA表達載體
