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《慢病毒介導(dǎo)的shrna干擾沉默mcl-1基因?qū)α馨土黾?xì)胞系生長(zhǎng)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的shRNA干擾沉默Mcl--1基因?qū)α馨土黾?xì)胞系生長(zhǎng)的影響姓名：岳光星申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張明智201204摘要慢病毒介導(dǎo)的shRNA干擾沉默Mcl．1基因?qū)α馨土黾?xì)胞系生長(zhǎng)的影響研究生導(dǎo)師岳光星張明智鄭少I'1大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科河南鄭州450052摘要：j￡：t；，月京惡性淋巴瘤是最常見的惡性腫瘤之一，它是由臨床病理類型不同的一組異質(zhì)性腫瘤疾病構(gòu)成的。NK／T細(xì)胞淋巴瘤是惡性淋巴瘤的一種亞型，與其它類型的淋巴瘤顯著不同，其高發(fā)于亞洲和南非，組織學(xué)特征為血管破壞、腫瘤壞死和凋亡。雖然大部分病人早期腫瘤局限于局部，但
2、NK／T細(xì)胞淋巴瘤是一組高度侵襲性、對(duì)化療耐藥及預(yù)后較差的腫瘤。目前許多傳統(tǒng)的治療方法會(huì)帶來(lái)許多毒副反應(yīng)，從而影響治療的效果和患者的生活質(zhì)量。因此，尋找一種新的治療NK廠r細(xì)胞淋巴瘤的方法是勢(shì)在必行的。最近幾年許多新的治療方法包括基因治療得到了充分的發(fā)展。慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾是基因治療的一種新方法。病毒介導(dǎo)的RNA干擾相對(duì)于非病毒介導(dǎo)的RNA干擾有許多優(yōu)勢(shì)，比如干擾效率高、宿主范圍廣以及治療基因表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)等。表達(dá)ShRNA的病毒載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和近些年發(fā)現(xiàn)的慢病毒。其中在許多實(shí)體瘤的研究中發(fā)現(xiàn)慢病毒對(duì)人體無(wú)明顯毒副作用，安全性較高。據(jù)報(bào)道許多病毒載體在淋巴瘤
3、細(xì)胞中的感染率非常低，因此對(duì)于淋巴瘤來(lái)說(shuō)尋找一個(gè)合適的病毒載體是進(jìn)行基因治療研究的第一步。我們之前的研究已經(jīng)證實(shí)了慢病毒是一種理想的載體，可以高效的轉(zhuǎn)導(dǎo)外源性的基因進(jìn)入淋巴瘤細(xì)胞。摘要Mcl．1基因是Bcl．2家族的一員，它能夠通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前已經(jīng)證實(shí)許多類型腫瘤細(xì)胞的生存和發(fā)展都是依賴于Mcl．1基因的，在血液系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體瘤中發(fā)現(xiàn)Mcl．1基因的高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤的形成，包括白血病和肝癌等。在轉(zhuǎn)基因小鼠中Mcl．1高表達(dá)能夠顯著增加B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生率，在許多腫瘤類型中降低Mcl．1的表達(dá)能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)Mcl．1的高表達(dá)
4、可以引起某些腫瘤的耐藥性。因此Mcl．1基因有望成為腫瘤治療的新靶標(biāo)。目的研究慢病毒介導(dǎo)的髓細(xì)胞白血病基因(Mcl．1)短發(fā)夾RNA干擾(shRNA干擾)對(duì)NK／T淋巴瘤細(xì)胞系SNK．6增殖和凋亡的影響。方法設(shè)計(jì)以Mcl．1為靶點(diǎn)的短發(fā)夾RNA(shRNA)并構(gòu)建攜帶此shRNA的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染淋巴瘤細(xì)胞系SNK-6，熒光定量PCR(qPCR)及Westernblot方法檢測(cè)病毒感染后Mcl一1基因mRNA及蛋白表達(dá)變化，四甲基偶氮唑鹽法(MTr法)和流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖和凋亡變化的情況。結(jié)果成功構(gòu)建Mcl一1一shRNA慢病毒表達(dá)載體，并可有效感染淋巴瘤細(xì)胞株SN
5、K．6，感染后SNK-6細(xì)胞Mcl．1基因的mRNA水平及蛋白水平表達(dá)明顯下調(diào)，MTr法檢測(cè)顯示慢病毒介導(dǎo)的Mcl．1基因shRNA干擾與對(duì)照組相比可明顯抑制SNK-6細(xì)胞增殖(31．6％±3．3％vs5．8％±2．7％，P<0．001)，流式細(xì)胞儀測(cè)定感染后細(xì)胞凋亡明顯高于對(duì)照組(28．9％±2．1％vs5．3％±1．5％，P<0．001)。結(jié)論1、成功構(gòu)建Mcl．1．shRNA慢病毒表達(dá)載體，并可有效感染淋巴瘤細(xì)胞株SNK．6。2、慢病毒介導(dǎo)的Mcl．1基因RNA干擾技術(shù)可特異性阻斷SNK-6細(xì)胞Mcl．1基因的表達(dá)，抑制細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。關(guān)鍵詞淋巴瘤；髓
6、細(xì)胞白血病基因．1：短發(fā)夾RNA：凋亡；慢病毒載體llAbstraclTheeffectsoflentivirus．mediatedshRNAinterferencetargetingMcl-1ongrowthofNK／T-celilymphomaPostgraduate：YueGuangxingsupervisor：ZhangMingzhiDepartmentofOncology，TheFirstAffiliatedHospitialofZhengzhouUniversityZhengzhou450052AbstractLymphomaisthemostcommonh
7、ematologicmalignancyandcomprisesaheterogeneousgroupofmalignanciesconsistingofdifferentclinicpathologicentities．NK／T—celllymphomaisadistinctsubtypeoflymphomarelativelycommoninAsiaandSouthAmerica．Histologicalfeaturesofthisdiseaseareangiocentricity，angiodestruction，andmassiv
