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1、溫病濕熱證大鼠模型肝線粒體K+-Na+-ATP酶活力變化的對(duì)比研究作者：程方平劉松林李云海周璇梅國強(qiáng)【摘要】［目的］探討多因素復(fù)合造模方法對(duì)模型大鼠能量代謝的影響。［方法］分為正常組、濕熱模型組（高脂+高溫高濕+大腸桿菌）、模型對(duì)照組（普食+高溫高濕+大腸桿菌）；運(yùn)用定磷法測(cè)肝線粒體Na+-K+-ATPase活性。［結(jié)果］模型組與模型對(duì)照組肝線粒體Na+-K+-ATPase活性均較正常組顯著降低，但兩者比較無顯著性差異。［結(jié)論］肝線粒體Na+-K+-ATPase活性顯著降低，是濕熱證模型的病理基礎(chǔ)之一，與是否高脂飲食無關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】溫病；肝；線粒體；酶活力；K+-Na+
2、-ATP；濕熱證；大鼠 Abstract:［Objective］Toexploretheeffectsofthemodelestablishmentmethodsonenergymetabolismindicatorsofmodelrats.［Methods］Setupnormalgroup,modelgroup(highfatdiet+hightemperatureandhighhumidity+colonbacillus)，contrarygroup(routinediet+hightemperatureandhighhumidity+colonbacillus)
3、，theactivityoflivermitochondria8Na+-K+-ATPasewasdetectedbyprincipleofdeterminesthecontentofphosphorus.［Results］TheNa+-K+-ATPaseactiveinmodelgroupwasremarkablydecreased，andhadnosignificantlydifferencefromcontrarygroup.［Conclusion］ThelivermitochondriaNa+-K+-ATPasebeingremarkablydecreasedis
4、oneofpathologicalbasisofdamp-heatmodel，un-relatedwithhighfatdiet. Keywords:febriledisease;liver；mitochondria；enzymeactivity;K+-Na+-ATP;damp-heatsyndrome；rat濕熱既是中醫(yī)特有的致病原因，又是具有廣泛臨床基礎(chǔ)的中醫(yī)病證，涉及多系統(tǒng)、多器官、多組織的病變。為了進(jìn)一步揭示濕熱證的本質(zhì)，我們模擬濕熱發(fā)病原因，觀察環(huán)境、生物因素對(duì)模型大鼠肝線粒體Na+-K+-ATPase活性的影響?！ ?實(shí)驗(yàn)材料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)w
5、istar大鼠，雌雄各半，體重200g±10g。由湖北省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。8 1.2藥物及試劑 (1）大腸桿菌：菌種號(hào)：AB94013。武漢大學(xué)微生物保藏中心提供。湖北中醫(yī)學(xué)院微生物室復(fù)壯、培養(yǎng)，應(yīng)用濃度為109/ml，4℃冰箱保存。（2）高脂飼料：膽固醇、膽酸鈉，武漢亞法生物技術(shù)有限公司提供。配方：普通飼料+膽固醇25g/kg+膽酸鈉2g/kg+蛋黃粉80g/kg+豬脂100g/kg。（3）ATP酶測(cè)試盒：南京建成生物工程研究所?！ ?.3實(shí)驗(yàn)儀器 人工氣候箱SHH-500GS型，重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠，電子體溫計(jì)上海醫(yī)用儀器廠，臺(tái)式低溫高速離心機(jī)TGL-16
6、G-A，上海安亭科學(xué)儀器廠，721分光光度計(jì)16C14型，上海精密科學(xué)儀器有限公司?！ ?實(shí)驗(yàn)方法 2.1動(dòng)物分組 常規(guī)喂養(yǎng)3d，隨機(jī)將24只大鼠分為：正常組、濕熱模型組（高脂+高溫高濕+大腸桿菌）、模型對(duì)照組（普食+高溫高濕+大腸桿菌）。8 2.2造模方法 正常組：在正常溫濕度（溫度24～28℃，相對(duì)濕度60%～75%）環(huán)境下，普通混合飼料喂養(yǎng)29d。濕熱模型組：在正常溫濕度環(huán)境下，高脂飼料喂養(yǎng)2周后，再放入人工氣候箱中（溫度35℃，相對(duì)濕度95%），每天造模時(shí)間（上午8～12時(shí)，下午13～17時(shí)），高脂飼料喂養(yǎng)。12d后，灌服大腸桿菌109/ml·200g-
7、1（預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索劑量）。4h后，再加強(qiáng)灌服1次，繼續(xù)放入人工氣候箱造模觀察3d。模型對(duì)照組：過程同濕熱模型組，整個(gè)過程普食喂養(yǎng)?！ ?.3標(biāo)本采集 分別于濕熱模型組、模型對(duì)照組灌服大腸桿菌（濃度109ml·200g）后72h，脫椎處死大鼠。迅速剖腹取各組肝組織置于4℃生理鹽水中，洗去表面的殘血，濾紙吸干，取大鼠肝臟6g，放入盛有10%福爾馬林的容器中，存-20℃冰箱中。取肝組織1g，剪碎，按重量體積比，加入分離介質(zhì)（內(nèi)含蔗糖0.3mol/L，HEPES5mmol/L，EDTA0.5mmol/L，PH7.4）制備成10%的組織勻漿，隨后以3
