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《時(shí)間分辨熒光生化分析用新型銪配合物熒光標(biāo)記物》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、博士學(xué)位論文時(shí)間分辨熒光生化分析用新型銪配合物熒光標(biāo)記物NovelEuropiumComplex—BasedLuminescenceBiolabelsforTime-ResolvedLuminescenceBioassayApplication學(xué)10907053大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnologyI㈣剿大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知,除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外,本論文不包含其他
2、個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果,也不包含其他已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處,本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文題目:豳毯藍(lán)超巡煎匿!私絲鐳醯遜囪鴦遂物作者簽名:猩堇亟氐日期:塑&年—£月—笪日大連理工大學(xué)博士學(xué)位論文摘要利用稀土熒光配合物作為標(biāo)記物的時(shí)間分辨熒光生化分析技術(shù)由于具有靈敏度高、背景熒光干擾小等優(yōu)點(diǎn)而在臨床免疫分析、核酸雜交分析及生物成像分析等方面得到了廣泛的應(yīng)用。作為該技術(shù)發(fā)展的基礎(chǔ)試劑,具有優(yōu)良熒光
3、性質(zhì)的新型稀土熒光配合物生物標(biāo)記物研制是該領(lǐng)域的一個(gè)重要課題。本學(xué)位論文研究分別設(shè)計(jì)合成了幾種新型的基于銪熒光配合物的生物標(biāo)記物,在充分表征各種標(biāo)記物熒光性質(zhì)的基礎(chǔ)上,建立了這些標(biāo)記物在時(shí)間分辨熒光生化分析中的應(yīng)用方法。設(shè)計(jì)合成了三種帶有氯磺?;钚曰鶊F(tuán)的新型四齒p二酮類配位體BHHBCB、BPPBCB及BTBBCB,其與銪(III)離子的配合物與牛血清白蛋白(BSA)結(jié)合后在水溶液中的熒光發(fā)光量子產(chǎn)率及熒光壽命分別為40.O%、O.52ms;36.1%、0.49ms及34.0%、0.48ms,用于時(shí)間
4、分辨熒光測(cè)定的檢測(cè)下限分別為2.5×10.13mol/L、2.8X10叫3mol/L及4.6×10_13mol/L。以配合物BHHBCB-Eu”為標(biāo)記物制備了BHHBCB-Eu3+標(biāo)記的鏈霉親合素,并對(duì)人前列腺特異抗原(PSA)及鼠隱孢子蟲分別進(jìn)行了時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定及時(shí)間分辨熒光顯微成像測(cè)定,證明了新型標(biāo)記物在高靈敏度時(shí)間分辨熒光免疫分析及病原微生物成像分析中的實(shí)用價(jià)值。利用BHHBCB-Eu3+進(jìn)一步與2一MN-一--乙基苯胺4基卜4,6<二吡唑一1一基卜1,3,5一三嗪(BPT)配位后可形成可見
5、光激發(fā)三元配合物BHHBCB-Eu3LBPT的性質(zhì),將BHHBCB-Eu3LBPT與硅烷化試劑3.氨基丙基三乙氧基硅烷共價(jià)鍵合后在微乳液體系中制備出了具有可見光激發(fā)性能及長(zhǎng)熒光發(fā)光壽命的硅膠基質(zhì)納米銪熒光生物標(biāo)記物。將納米標(biāo)記物與轉(zhuǎn)鐵蛋白鍵合后用于人宮頸癌細(xì)胞(HeLa細(xì)胞)的時(shí)間分辨熒光顯微成像測(cè)定,證明了其在可見光激發(fā)時(shí)間分辨熒光活細(xì)胞成像測(cè)定中的應(yīng)用價(jià)值。采用將三元配合物BHHBCB-Eu3+.-BPT直接共價(jià)鍵合在BSA分子上的方法制備出了具有良好水溶性、可見光激發(fā)且可用于生物標(biāo)記的銪配合物_B
6、SA結(jié)合體BSA出HHBCB也u3+坷IPT。將BS√懈HHBCB—Eu3+._BPT與葉酸鍵合后用于HeLa細(xì)胞及RAW264.7細(xì)胞的時(shí)間分辨熒光成像測(cè)定,證明了其在基于細(xì)胞表面葉酸一葉酸受體親和作用的癌細(xì)胞時(shí)間分辨熒光識(shí)別成像測(cè)定中的有用性。成像關(guān)鍵詞:稀土熒光配合物;生物標(biāo)記;時(shí)間分辨熒光免疫分析;時(shí)間分辨熒光生物時(shí)間分辨熒光生化分析用新型稀土熒光標(biāo)記物NovelEuropiumComplex—BasedLuminescenceBiolabelsforTime-ResolvedLuminesce
7、nceBioassayApplicationAbs仃actTime-resolvedluminescencebioassaytechniqueusingluminescentlanthanidecomplexesaslabelshasbeenwidelyusedforclinicalimmunoassay,DNAhybridizationassayandbioimagingduetoitsadvantagesofhighsensitivity,loweffectofbackgroundfluoresce
8、nce,andSOon.Askeyreagentsofthistechnique,thedevelopmentofnewlanthanideluminescencebiolabelsthathavegoodluminescencepropertiesisanimportantwork.Inthisdoctoraldissertation,severalkindsofnoveleuropiumcomplex—basedluminescence