鹽析萃取偶聯(lián)柱層析分離純化血漿蛋白

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1、專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文鹽析萃取偶聯(lián)柱層析分離純化血漿蛋白IntegratedProcessofSalt--outExtractionandColumnChromatographyforSeparationandPurificationofPlasmaProteins學(xué)311l8024完成日期：2Q131Q5大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個(gè)人或集體已

2、經(jīng)發(fā)表的研究成果。也不包含其他已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過(guò)的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文題目：絲塹舞熟造毯塹巨塹生蔓縫絲壘盜壹國(guó)作者簽名：蕉鹼詮日期：竺!至年—正月_

3、墮日大連理工大學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文摘要血漿蛋白由數(shù)百種具有廣泛生理功能的蛋白質(zhì)組成，其中白蛋白與免疫球蛋白占據(jù)著血液制品中主要的市場(chǎng)份額。血漿成分十分復(fù)雜，目前工業(yè)上血漿蛋白的分離方法主要采用有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法和柱層析，但這些方法尚存在著分離環(huán)境要求低溫、分離純化步驟繁瑣、純度和收率

4、低等缺點(diǎn)。本論文開展了親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取偶合柱層析分離純化血漿蛋白的研究，以期為血漿蛋白的分離純化提供新方法。(1)首先考察了免疫球蛋白G(IgG)在親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取中的分配規(guī)律，選取磷酸氫二鉀、碳酸鈉、檸檬酸鈉三種鹽分別與乙醇組成鹽析萃取體系，考察了不同鹽、醇含量對(duì)IgG在體系中分配的影響。結(jié)果表明，20％磷酸氫二鉀(w／w)．14％乙醇(w／w)、19％碳酸鈉(w／w)．13％乙醇(w／w)、25％檸檬酸鈉(w／w)．19％乙醇(w／w)為三種鹽析萃取體系的最佳組成，在這些條件下，IgG回收率分別為97．4％、93．1％、90．2％。采用

5、ELISA法檢測(cè)了磷酸氫二鉀一乙醇、碳酸鈉．乙醇兩種體系萃取后IgG的活性，發(fā)現(xiàn)經(jīng)磷酸氫二鉀體系萃取后，IgG活性基本維持不變，而經(jīng)碳酸鈉體系萃取后，IgG活性損失率達(dá)70％以上。(2)將20％磷酸氫二鉀(w／w)一14％乙醇(w／w)鹽析萃取體系調(diào)節(jié)pH至7．0后，直接從豬血漿中萃取IgG與白蛋白，鹽析萃取能明顯去除部分雜質(zhì)蛋白，葡萄糖的去除率達(dá)51．82％。根據(jù)上相中富含鹽的特點(diǎn)，選取疏水層析作為后續(xù)純化手段，可得到較高純度的白蛋白與IgG混合物，該混合物再經(jīng)過(guò)陰離子交換層析后，可得到高純度白蛋白和IgG，白蛋白和IgG樣品經(jīng)非還原SDS．PAGE

6、分析均顯現(xiàn)單一條帶，光密度掃描顯示純度大于99％。上述結(jié)果表明，親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取偶聯(lián)柱層析技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)血漿蛋白的高效分離。和傳統(tǒng)的鹽析、冷乙醇法和柱層析法相比，具有操作條件溫和，分相時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便，易于放大，目標(biāo)蛋白純度高等優(yōu)點(diǎn)，具有工業(yè)化應(yīng)用的前景。關(guān)鍵詞：血漿蛋白：親水性有機(jī)溶劑鹽析萃?。喊椎鞍祝好庖咔虻鞍譍：分離純化：柱層析IntegratedProcessofSalt-outExtractionandChromatographyforSeparationandPurificationofplasmaproteinsAbstractPla

7、smaproteinconsistofhundredsofproteinswithnumerousphysiologicalfunctions，andalbuminandimmunoglobulinsoftheplasmaproteinoccuppyagreatshareofthebloodproductsmarket．However，theseparationandpurificationofthemarequitedifficultbecauseofthecomplexityofblood．Organicsolventprecipitation，s

8、alting—outandcolumnchromatographyarewidelyusedtOseparatesuchproductsinindustry，however，thedisadvantagesofthesemethods，suchaslowoperationtemperature。nlulti。stepsseperationandlowrecoveryrate，cannotbeignored．InthiSthesis，anintegratedmethodofhydrophilicorganicsolventsalting．Outextra

9、ction(HOS—SOE)andcolumnchromatographywasdevelop