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《EAE時(shí)室周器官正中隆起的形態(tài)學(xué)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中文摘要EAE時(shí)室周器官正中隆起的形態(tài)學(xué)研究摘要目的：對(duì)EAE不同時(shí)期的大鼠正中隆起(ME)進(jìn)行動(dòng)態(tài)形態(tài)學(xué)觀察，探討該室周器官在機(jī)體不同免疫狀態(tài)下的變化。方法：選擇健康Wistar雌性大鼠72只，體重180．2009,主動(dòng)誘導(dǎo)制備EAE模型，在免疫后6小時(shí)，7天，14天和21天(分別為柔膜反應(yīng)期組、潛伏期組、發(fā)病極期組、恢復(fù)期組)，對(duì)ME進(jìn)行HE染色、TUNEL技術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞、掃描電鏡、透射電鏡觀察。lEAE模型制備：用豚鼠脊髓勻漿加完全福氏佐劑，主動(dòng)免疫Wistar雌性大鼠，在免疫后6小時(shí)(柔膜反應(yīng)期)，7天(潛伏期)，14天(發(fā)病極期)，
2、21天(恢復(fù)期)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，常規(guī)經(jīng)心灌注固定，取腦，分別以HE和TUNEL技術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞，掃描電鏡，透射電鏡，觀察ME形態(tài)學(xué)變化。2光鏡標(biāo)本制備：常規(guī)經(jīng)心灌注，固定，取腦，冠狀方向去除視交叉以前和漏斗柄以后部分，留取中間部分腦塊后固定24小時(shí)，然后在磷酸緩沖液(0．1M，pH7．2)中沖洗三次，每次6小時(shí)，再用梯度酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，修塊，用Leica石蠟切片機(jī)連續(xù)切片，片厚5、m。常規(guī)HE染色，脫水，透明，封片。顯微鏡觀察，OLYMPUS萬能顯微鏡照相。3掃描電鏡樣品制備：麻醉、灌注方法同光鏡標(biāo)本制備，中文摘要但灌注液為1．5
3、％的多聚甲醛和2．5％戊二醛磷酸緩沖液(0．1M，pH7．2)灌注完畢取材：將腦腹面朝上，在視交叉兩側(cè)各lrnm平行做兩道矢狀切口向后延伸至漏斗柄，在漏斗柄后做一冠狀切口，在距離腦底面3mm處做一平行切口，所取下的腦塊即含ME，觀察時(shí)腹面朝下，上面的小凹即為腦室面，視交叉為前，漏斗柄為后。將取1-ME用PB沖洗后置于2．5％戊二醛(4℃)中。雙蒸水沖洗，梯度酒精脫水，叔丁醇置換，二氧化碳臨界點(diǎn)干燥。真空噴金。日立S一3500N掃描電鏡觀察，照相。4透射電鏡樣品制備：取材過程同掃描電鏡樣品制備，在灌注固定后，取ME組織塊放入4％戊二醛中固定，l％
4、鋨酸固定1h，Epon812包埋，LKB—V型超薄切片機(jī)切片，T一7500N型透射電鏡觀察照相。5TUNEL實(shí)驗(yàn)組樣晶制各：動(dòng)物的麻醉、灌注、取材和后固定、石蠟切片同光鏡標(biāo)本制各，常規(guī)脫蠟、入水，蛋白酶K消化，0．3％H202甲醇液封閉，冰}：透化后加上TUNEL反應(yīng)液，POD轉(zhuǎn)化，DAB顯色。HE復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封片。OnMPUS萬能顯微鏡觀察并照相。6凋亡細(xì)胞評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：強(qiáng)微鏡下觀察，以胞核固縮，深棕黃色的細(xì)胞為陽性染色。隨機(jī)選取5個(gè)不重疊視野，采用自動(dòng)免疫組化分析系統(tǒng)Version2．0記錄陽性細(xì)胞數(shù)。采用單因素方差分析，
5、有顯著差異者用q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，以p<0．05為有顯著差異。結(jié)果：1光鏡觀察結(jié)果：HE染色，對(duì)照組ME室管膜細(xì)胞呈單層柱狀排列，EAE潛伏期、發(fā)病極期，室管膜細(xì)胞排列密集，呈雙層或復(fù)層排列，以發(fā)病極期最明顯。柔膜反中文摘要應(yīng)期和恢復(fù)期接近于對(duì)照組。室管膜細(xì)胞排列的密集程度，測(cè)量每50x50#m2細(xì)胞數(shù)，發(fā)病極期>潛伏期>柔膜反應(yīng)期和恢復(fù)期。2掃描電鏡觀察結(jié)果：對(duì)照組ME處少纖毛區(qū)可見豐富的分泌顆粒，大小均勻，表面光滑，直徑0．2—3．0#m。實(shí)驗(yàn)組ME表面的分泌顆粒形態(tài)、分布形式、大小出現(xiàn)明顯變化，在柔膜反應(yīng)期大的分泌顆粒(贏徑約1．0一1．
6、5舯)減少，小的分泌顆粒(直徑約O．3舯)增多，排列更加稠密；潛伏期時(shí)分泌顆粒以大的為主，排列稀疏；發(fā)病極期時(shí)ME表面分泌顆粒減少，相互粘連似葡萄狀，室管膜上可見大量吞噬細(xì)胞樣細(xì)胞附著，于這些細(xì)胞上還可見到正在形成的分泌顆粒；恢復(fù)期室管膜表面分泌顆?；菊?，有的部位相互粘連成團(tuán)狀或條索狀，仍可見到散在吞噬細(xì)胞樣細(xì)胞。3透射電鏡觀察結(jié)果：EAE大鼠免疫后6小時(shí)，柔膜反應(yīng)期時(shí)，可見室管膜細(xì)胞內(nèi)大量細(xì)胞器聚集于細(xì)胞的游離緣，線粒體密集，室管膜下層細(xì)胞出現(xiàn)胞質(zhì)腫脹，充滿水腫空泡，直徑約400．600nm，在血管周圍可見豐富的線粒體聚集現(xiàn)象。潛伏期時(shí)，
7、室管膜細(xì)胞不同的分泌現(xiàn)象在該處皆可見到。有的分泌顆粒呈球形，贏徑約5．0#m，與室管膜細(xì)胞脫離；有的分泌顆粒呈蘑菇狀，部分與室管膜細(xì)胞相連，無胞膜，內(nèi)含許多有膜囊泡，結(jié)構(gòu)松散。于發(fā)病極期可見室管膜細(xì)胞向外凸起，形成較大的分泌顆粒，長(zhǎng)橢圓形，有胞膜，最大徑約2．5#m，未見空泡，均質(zhì)狀，較致密，細(xì)胞內(nèi)有溶酶體吞噬現(xiàn)象；于室管膜上可見較多的直徑為250．400nm的分泌顆粒。在恢復(fù)期室管膜細(xì)胞表面也可見到分泌顆粒，但形態(tài)不規(guī)則，最大徑3．5#m，內(nèi)含多種囊泡，約50個(gè)，大中文摘要小不等，圓形、橢圓形；緊貼于室管膜細(xì)胞下層，可見電子密度高的細(xì)胞，胞質(zhì)
8、濃縮，細(xì)胞核皺縮，折曲，可能是小膠質(zhì)細(xì)胞。4TUNEL實(shí)驗(yàn)組觀察結(jié)果：對(duì)照組僅見個(gè)別凋亡細(xì)胞。計(jì)數(shù)50×50／zm2范圍內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)(爿土s)。潛伏期
