大鼠正中隆起nestin,sox2和brdu陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究

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1、一虢老發(fā)聊簽?zāi)露居《灰惠N蘭f厶f多年;月%日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外,文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果,指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě),文責(zé)自負(fù)。研究生簽名:龍善\一章:鳥(niǎo)喜甲導(dǎo)師簽章:。//l,f渺哆年多眵‘日目錄中文摘要???????????????????????????1英文摘要???????????????????????????4英文縮寫(xiě)????????????????????

2、???????7研究論文大鼠正中隆起Nestin,Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究前言???????????????????????????8刖吾???????????????????????????舀材料與方法????????????????????????9結(jié)果??????????????????????????.16附圖??????????????????????????.20附表??????????????????????????.34討論??????????????????????

3、????.35結(jié)論??????????????????????????.37參考文獻(xiàn)????????????????????????.38綜述正中隆起伸長(zhǎng)細(xì)胞的屏障功能??????????????.40致謝???????????????????????..????.53個(gè)人簡(jiǎn)歷??????????????????????????.54中文摘要大鼠正中隆起Nestin,Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究摘要目的:觀察正中隆起的Nestin,Sox2,BudU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)。方法:選擇健康S

4、D大鼠30只,體重180.2009,隨機(jī)分成兩組:①正常組(n=15);②模型組(n=15):注射BrdU。1BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備:分別于16:00和18:00,按照50mg/kg劑量對(duì)模型組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射BrdU生理鹽水溶液,連續(xù)給藥三天,制備BrdU模型。2取材和標(biāo)本制備:正常組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,后固定,浸蠟包埋,選取含正中隆起部分,石蠟切片,厚度為5pm,分別經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色、Nestin和Sox2免疫組織化學(xué)染色;BrdU模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,

5、取材,固定,浸蠟包埋,選取含正中隆起部分,石蠟切片,厚度為5pm,進(jìn)行BrdU免疫組織化學(xué)染色,封片后OlympusBX.UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。3Nestin,Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色步驟:正常組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,后固定,蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分,冰凍切片,厚度為8肛m,經(jīng)Nestin,Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色,50%甘油封片后OlympusBX.UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。4BrdU,Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色:BrdU模型動(dòng)物6只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,

6、后固定,蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分,冰凍切片,厚度為8pm,經(jīng)BrdU,Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色,50%甘油封片后OlympusBX.UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:照片的陽(yáng)性細(xì)胞采用專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件Image.ProPlus6.0對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞和總細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算陽(yáng)性率。結(jié)果:1甲苯胺藍(lán)染色正常組大鼠下丘腦的冠狀切片顯示正中隆起位于第三腦室的基底部。甲苯胺藍(lán)染色后,細(xì)胞核呈藍(lán)色,尼氏體呈藍(lán)紫色,正中隆起被分為五個(gè)中文摘要層次:室管膜層、室管膜下層、纖維層、網(wǎng)狀層和柵狀層。正中隆起及第三腦

7、室側(cè)壁的室管膜細(xì)胞分為四種不同形態(tài)。正中隆起的腹側(cè)被腺垂體結(jié)節(jié)部覆蓋,ME含有大量毛細(xì)血管。2免疫組織化學(xué)染色2.3Nestin染色:ME中央部2/3的室管膜層和室管膜下層,胞核較大,胞質(zhì)為Nestin強(qiáng)陽(yáng)性;ME兩側(cè)的室管膜層和室管膜下層,胞核較小,胞質(zhì)為Nestin弱陽(yáng)性;ME纖維層和網(wǎng)狀層有散在分布的粗大Nestin陽(yáng)性突起,Nestin陽(yáng)性細(xì)胞胞核較大,散在分布;在柵狀層偶見(jiàn)Nestin陽(yáng)性細(xì)胞,胞核較大。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Nestin陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:6.01+5.30%。ME的Nestin陽(yáng)性細(xì)

8、胞表達(dá)率:42.45+3.42%。2.2Sox2染色:ME室管膜層和室管膜下層的Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞緊密排列,ME纖維層和網(wǎng)狀層,Sox2陽(yáng)性細(xì)胞較稀疏。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:32.77+7.24%。ME的Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:48.30+5.66%。2.3BrdU染色:BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在ME的纖維層和網(wǎng)狀層零星分布,少數(shù)位于柵狀層,偶見(jiàn)于室管膜下層。第三腦室單側(cè)側(cè)壁BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:O.124-0.08%。ME的

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