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1、甘蔗離體培養(yǎng)的胚性細(xì)胞團(tuán)誘導(dǎo)與分化研究摘要本論文以桂糖2l號(hào)(G21)、桂糖28(G28)、新臺(tái)糖22號(hào)限OC22)和巴西固氮甘蔗RB86.7515(B8)四個(gè)甘蔗品種的嫩葉鞘進(jìn)行離體培養(yǎng),研究不同激素種類及組合對(duì)甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)的誘導(dǎo)、繼代增殖、分化、生根的效應(yīng)。同時(shí),在離體培養(yǎng)過程中,對(duì)甘蔗愈傷組織和胚性細(xì)胞團(tuán)的顯微結(jié)果進(jìn)行觀察比較。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1、甘蔗愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果:(1)甘蔗愈傷組織誘導(dǎo)率最佳的激素組合是:MS+2,4_D3.0mg/L+NAAO.2mg/L¨汀1.Omg/L。G21、G28、ROC22、B8的
2、愈傷組織誘導(dǎo)率分別達(dá)到85.22%、79.21%、83.67%、78.63%。(2)MS比WMte、N6培養(yǎng)基更適合甘蔗外植體愈傷組織的誘導(dǎo)。(3)甘蔗外植體在誘導(dǎo)時(shí)加入5%椰子汁能提高愈傷組織誘導(dǎo)率,G21、G28、RoC22和B8的愈傷組織誘導(dǎo)率分別為87.33%,83.08%,84.13%和82.14%。(4)添加丙氨酸能提高甘蔗外植體愈傷組織的誘導(dǎo)率,G,21、G億8、ROC22和B8的誘導(dǎo)率分別為85.17%,82.14%,84.10%和80.79%。(5)在外植體誘導(dǎo)前期先暗培養(yǎng)后光培養(yǎng)能提高愈傷組織誘導(dǎo)率,G21、G28、R
3、OC22和B8的誘導(dǎo)率分別為86.95%,81.11%,83.60%和77.67%。(6)當(dāng)培養(yǎng)溫度為30℃時(shí),四個(gè)甘蔗品種的愈傷組織誘導(dǎo)率均達(dá)到最高值,G21、(挖8、RoC22和B8誘導(dǎo)率分別為88.33%,83.33%,86.27%和81.24%。(7)與其它季節(jié)相比較,在夏季取材,四個(gè)甘蔗品種愈傷組織誘導(dǎo)率均表現(xiàn)最高,(挖1、G曉8、RoC22和B8的誘導(dǎo)率分別達(dá)到84.00%,76.19%,83.59%和75.45%。(8)甘蔗外植體進(jìn)行低溫預(yù)處理會(huì)降低愈傷組織誘導(dǎo)效果。(9)不同季節(jié)甘蔗各品種之間的出愈時(shí)間早晚順序?yàn)椋篏21<
4、l的C22秋>夏。(10)使用MS+2,4一D3.0mg/L+M認(rèn)0.2mj嘰¨汀1.0mg/L+AC0.03g/L+PVPl.5g/L培養(yǎng)基及激素組合能有效的降低冬季甘蔗外植體的褐化率,G21、G28、I沁C22和B8的褐化率分別為10.11%,17.74%,14.31%和20.04%。2、甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)繼代增殖的試驗(yàn)結(jié)果(1)四種甘蔗品種均以MS+2,4.D3.Omg/L+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L培養(yǎng)基激素組合對(duì)胚性細(xì)胞團(tuán)的
5、增殖效果最好,G21、G28、ROC22和B8的胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)分別達(dá)到41.47倍,32.28倍,38.80倍和30.35倍。(2)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)時(shí)間為15天且繼代次數(shù)為第4代時(shí),四個(gè)甘蔗品種胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)達(dá)到最大值。G21、G28、ROC22和B8的胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)分別達(dá)到46.23倍,41.22倍,44.80倍,37.33倍。(3)與其它光照培養(yǎng)處理相比,先暗培養(yǎng)再光培養(yǎng)處理的愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)最高。G億1、(趁8、RoC22和B8的愈傷組織增殖倍數(shù)分別為4.45倍,3.33倍,4.13倍和3.13倍;而胚性細(xì)胞團(tuán)
6、的增殖倍數(shù)則分別達(dá)到37.45倍,30.oo倍,35.05倍和28.89倍。3、甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)的分化試驗(yàn)結(jié)果(1)四種甘蔗品種均以MS+NAAO.2mg/L+6一BA2.0mg/L+Ⅱ)Z0.04mg/L培養(yǎng)基及激素組合對(duì)愈傷組織分化的效果最好,G21、G倥8、ROC22和B8的分化率分別達(dá)到86.83%,82.44%,88.89%和80.00%。(2)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)時(shí)間為15天,且繼代次數(shù)為第4代時(shí),四個(gè)甘蔗品種愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)分化率均達(dá)到最大值。C挖1、G28、RoC22、B8愈傷組織的分化率分別達(dá)到88.11%,84.
7、70%,90.97%,80.15%;而胚性細(xì)胞團(tuán)的分化出芽率則分別達(dá)到92.28%,89.OO%,95.72%,87.98%。4、甘蔗芽增殖試驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)基與激素組合:MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.5mg/L+PP3330.5mg/L有利于甘蔗芽增殖及芽的生長。G2l、G28、RoC22、B8四個(gè)甘蔗品種的芽增殖倍數(shù)分別為5.03倍,4.35倍,5.32倍,3.78倍。5、甘蔗無菌苗生根試驗(yàn)結(jié)果三因素激素組合:1/2MS+NAA0.2mg/L+mA2.Omg/L+PP3331.0mg/L最有利于甘蔗無菌苗生根,四種甘蔗品種的生根率
8、均達(dá)到100%。6、甘蔗愈傷組織和胚性細(xì)胞團(tuán)的顯微結(jié)果分析甘蔗胚性細(xì)胞團(tuán)均有細(xì)胞結(jié)構(gòu)緊湊、細(xì)胞小、細(xì)胞核相對(duì)較大、染色后顏色較深的特點(diǎn);而愈傷組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為疏松、細(xì)胞大、細(xì)胞核相對(duì)較小、染