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《鐵皮石斛葉片原生質(zhì)體培養(yǎng)及離體根尖體細(xì)胞胚發(fā)生研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文鐵皮石斛葉片原生質(zhì)體培養(yǎng)及離體根尖體細(xì)胞胚發(fā)生研究姓名：詹忠根申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：張銘20030601摘要本研究論文之一是對(duì)鐵皮石斛無菌試管苗的幼嫩葉片原生質(zhì)體的游離及培養(yǎng)條件研究。結(jié)果表明原生質(zhì)體分離的適宜酶液配比是O．5％Pectinase和1．O％cellulaseOnozukaR—lO；酶解時(shí)間為6h；滲透壓調(diào)節(jié)劑的濃度為O．5M，以蔗糖作為滲透壓調(diào)節(jié)劑優(yōu)于甘露醇和葡萄糖，但是此時(shí)原生質(zhì)體的產(chǎn)量下降28．7—38．1％；在酶液中添加150mg．L’1的抗壞血酸及20mg．L1的Cacl：可分別使原生質(zhì)體的存活率提高9．2％
2、和15．7％；在酶解之前對(duì)材料進(jìn)行質(zhì)壁分離處理使原生質(zhì)體的產(chǎn)量提高了3．23％，存活率提高了4．2％。葉肉原生質(zhì)體培養(yǎng)，在3—5d開始第一次分裂，并能持續(xù)分裂至形成胚性細(xì)胞團(tuán)。較為適宜的培養(yǎng)條件是附加O．5mg．一N從及1．Omg．Lfl6一BA的MS。培養(yǎng)基；稍低的溫度(21±O．5℃)；1501x的持續(xù)光照；培養(yǎng)密度為5×105個(gè)．m一：采用液體淺層和雙層培養(yǎng)在出現(xiàn)分裂時(shí)間、分裂頻率等方面均優(yōu)于瓊脂糖包埋法和瓊脂島培養(yǎng)法，但液體淺層培養(yǎng)中細(xì)胞持續(xù)分裂較弱；暗處理24h的葉片原生質(zhì)體在培養(yǎng)中其內(nèi)含物的外溢及質(zhì)膜破裂情況均明顯減少，且分裂能力提高2．2％；培養(yǎng)基中添加5
3、0mg．L1的抗壞血酸、5mg．L1的cacl：、100mg．L1的精氨酸均使原生質(zhì)體的分裂能力有所提高：但低溫處理(5℃)24h的葉片，其原生質(zhì)體的產(chǎn)量與存活率沒有提高，反而有所下降，分裂能力也無明顯變化。本研究論文之二是以鐵皮石斛的離體根尖為外植體，研究了在不同的培養(yǎng)條件下離體根尖經(jīng)愈傷組織形成體細(xì)胞胚、直接產(chǎn)生體細(xì)胞胚及直接形成芽后再生植株。在改良Bs(微量元素為原來的l／3)中加入1．Omg．r2，4一D和3．Omg．L_16一BA對(duì)離體根尖的愈傷組織誘導(dǎo)較為合適，0．5mg．L_lN從有利于從愈傷組織上產(chǎn)生體細(xì)胞胚；6一BA明顯促進(jìn)離體根尖直接產(chǎn)生類原球莖，而
4、N從則有阻礙作用；同時(shí)N從的存在也使離體根尖直接成芽的時(shí)間延長(zhǎng)。對(duì)其再生植株的過程進(jìn)行細(xì)胞學(xué)觀察后認(rèn)為鐵皮石斛的類原球莖是單細(xì)胞起源的真正的體細(xì)胞胚。關(guān)鍵詞：石斛；原生質(zhì)體培養(yǎng)；細(xì)胞分裂；愈傷組織；類原球莖；體細(xì)胞胚發(fā)生ABS’lIltAC’l’E丘色ctsofisolated如dcultIm羽onprotoplastsderived丘omyoungleaVesofDe砌6f“mQ歷cfn講BXl聊“mef肘轡D踮pectictIlbeplantletwerediscussedin也ep印eLInollrstudy'theappm砸ateconditioninisoIa
5、tepr叩toplastisb硒icsolutioncontainedO．5％Pec血舔e∞d1．O％Celhd弱eOno孤kaR-lO．The婦eofenzyme訂錢【nnentis6h．Osmoticmedi啪conce芏l一訂ationisO．5M．Thesugarissup鰣ortom秈it01aIldglucose．Howevetin也eosmoticmedi啪tlleyieldisdecreaSedwithjn28．7—38．1％．If山eb雒icsDluti(mcoⅡtained1SOmg．L．1蹈cofbicacid鼬d20mg．L”cacl2、vill
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7、e．neapprop血teconditioninthecult眥eisMSlsupplemem—ed塒th0．5mg．L_1NAAa王訂1．Omg．L．16～BA．Forpro：oplastsurviVali11theiIlitiaIculturerelativelyJowtemperanJre(2l士0．5℃)aildlowlightimensiq(1501x)areprcferable．CulturedeIlsi諺is5×10’cell．mL．‘，The1lqIlidtlliIlculnlreanda囂ose-1iquiddou_bl
