HBV YMDD模序突變、凋亡抑制因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究

《HBV YMDD模序突變、凋亡抑制因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、HBVYMDI)模序突變、凋亡抑制因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文HBVYMDD模序突變、凋亡抑制因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)研究方向：基因診斷博士生：歐志英指導(dǎo)教師：何蘊(yùn)韶教授中文摘要HBV與肝癌的關(guān)系甚為密切，近年來HBV已明確為肝腫瘤病毒，是肝癌的重要風(fēng)險(xiǎn)因子之一，但其復(fù)雜的致癌機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。HBV多聚酶YMDD模序是HBV基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的功能保守區(qū)，對(duì)HBV病毒顆粒的裝配和致病過程具有重要作用，PORE保守區(qū)位點(diǎn)的突變直接影響到HBV病毒顆粒復(fù)制及致癌基因x等的表達(dá)，在HBV相關(guān)的肝癌中可能起著十分重要的作用，探討肝

2、癌中HBV多聚酶YMDD模序變異對(duì)肝癌發(fā)生的分子病毒機(jī)制的闡明很有意義。腫瘤中特異性高表達(dá)、與腫瘤細(xì)胞增殖和有絲分裂密切相關(guān)的midkine和survivin基因與腫瘤細(xì)胞凋亡也密切相關(guān)，目前受到廣泛關(guān)注。Midkine和survivin都可通過下調(diào)caspase．3達(dá)到凋亡抑制的目的。但midkine和survivin在肝癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其與肝癌臨床病理或肝癌生物學(xué)行為之間的關(guān)系仍不清楚，有必要進(jìn)一步作系統(tǒng)、深入地研究。我們從RBVYMDD模序突變的角度、腫瘤中midkine、survivin、caspase一3mRNA和蛋白表達(dá)、腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡多個(gè)角度進(jìn)行分析，探討與肝

3、癌發(fā)生相關(guān)的分子病毒機(jī)制，研究midkine、survivin和caspase．3在肝癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其與肝癌臨床病理或生物學(xué)特性之間的關(guān)系，探討HCC發(fā)生的分子機(jī)制，為肝癌的防治提供更多、更好的臨床和實(shí)驗(yàn)資料。}mVYM叩模序突變、凋亡抑制因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文1．1用改進(jìn)的反向斑點(diǎn)雜交方法對(duì)乙型肝炎病毒基因組中YMDD模序突變進(jìn)行快速、準(zhǔn)確地分型目的：開發(fā)一個(gè)新的、能快速和準(zhǔn)確的檢測(cè)HBVYMDD模序突變的方法。方法：利用反向斑點(diǎn)雜交(RDB)原理，結(jié)合具有負(fù)壓裝置的凱普雜DNA交儀，建立流過式反向斑點(diǎn)雜交方法，用以檢測(cè)HBVYMDD模序突變。雙

4、盲實(shí)驗(yàn)中，100個(gè)以前通過DNA測(cè)序的樣品用于評(píng)價(jià)本方法的敏感性和特異性。常規(guī)RFLP方法也用于檢測(cè)該方法的正確性。結(jié)果：雙盲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這種改進(jìn)的RDB方法準(zhǔn)確性和特異性達(dá)100％，而RFLP準(zhǔn)確性只有83％。臨床標(biāo)本檢測(cè)中，49例被高度懷疑為拉米夫定耐藥的病人標(biāo)本已成功地用本方法檢測(cè)。’結(jié)論：我們建立的這種流過式反向斑點(diǎn)雜交方法是一種簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)、半自動(dòng)化、準(zhǔn)確、敏感和防污染的檢測(cè)HBV基因組中拉米夫定耐藥突變的方法。1．2I-IBVYMDD模序突變及其與肝癌發(fā)生的關(guān)系背景：HBV持續(xù)感染與肝細(xì)胞癌的發(fā)生存在密切聯(lián)系己被公認(rèn)，然而感染HBV的病人發(fā)展成為HCC的具體原

5、因并不清楚。HBV多聚酶區(qū)／逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)YMDD模序是髓v復(fù)制所必需的，但HBVYMDD模序突變與肝病臨床結(jié)果之間的關(guān)系目前國(guó)內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報(bào)道。目的：為探討HBV多聚酶區(qū)／逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的YMDD模序突變與肝病臨床結(jié)果之間的關(guān)系，分析肝癌血清HBVYMDD模序突變規(guī)律。闡明HBVYMDD模序突變及其與肝癌的關(guān)系。方法：血清nBvDNA提取后用已建立的“流過式”反向斑點(diǎn)雜交方法分析了45例LC、47例CHB和60例肝癌病人血清HBVYMDD模序突變情況。統(tǒng)計(jì)分析CHB、LC和HCC中HBVYMDD模序突變與拉米夫定用藥時(shí)間、ALT、AST等的關(guān)系。IIHBVYMDD模序突變、凋亡抑制因

6、子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的初步研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果：經(jīng)統(tǒng)計(jì)未用藥的HCC組、短期用藥的LC組和長(zhǎng)時(shí)間用藥的CHB組中HBVYMI)D模序突變率分別為：1．67％(1／60)、4．44％(2／45)和63．82％(30／47)。HCC組同LC組相比，差異不顯著(p=0．4)：而CHB組和HCC組或LC組相比，都存在顯著差異。通過Spearman相關(guān)性分析表明，HBVYMDD模序突變與用藥時(shí)間長(zhǎng)短顯著相關(guān)(p<0．01)，與HCC的發(fā)病無關(guān)。HBVYMDD模序突變與ALl、相關(guān)性不顯著(p=O．126)，但與AST顯著相關(guān)(p

7、YMDD突變有關(guān)的較為敏感的肝功能生化診斷和病情監(jiān)測(cè)指標(biāo)。AST是肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重程度的指標(biāo)，很好地反映了HBV引起的肝病臨床結(jié)果。HBVYMDD模序突變與肝臟病理過程(慢乙肝、肝硬化、肝癌)無關(guān)，只與拉米夫定用藥時(shí)間長(zhǎng)短密切相關(guān)，結(jié)果表明HBVYMDD模序突變并不是肝癌致病的分子機(jī)制。2．1實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)midkine、survivin、caspase一3和p-actin基因表達(dá)方法的建立目的：構(gòu)建包含midkine、survivin、caspase-3及[I-actin基因片