正常體重、超重和肥胖兒童腸道菌群差異研究

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1、學校代碼：10286分類號：R12密級：公開UDC：614學號：152910正常體重、超重和肥胖兒童腸道菌群差異研究研究生姓名：孫海翔導師姓名：沈孝兵教授申請學位類別醫(yī)學碩士學位授予單位東南大學一級學科名稱公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學論文答辯日期2018年6月7日二級學科名稱勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學學位授予日期2018年6月20日答辯委員會主席王蓓教授評閱人S1800706S18007072018年6月8日碩士學位論文正常體重、超重和肥胖兒童腸道菌群差異研究專業(yè)名稱：勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學研究生姓名：孫海翔導師姓名：沈孝兵STUDYONTHEDIFFERENCEOFINTESTINALFLORAI

2、NCHILDRENWITHNORMALWEIGHT,OVERWEIGHTANDOBESITYAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYSUNHai-xiangSupervisedbyProf.SHENXiao-bingSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityMay2018東南大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研宄成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外論文中不包含

3、其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過，的研究成果，也不包含為獲得東南大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研宄所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：１東南大學學位論文使用授權(quán)聲明東南大學、中國科學技術(shù)信息研宄所、國家圖書館、《中國學術(shù)期刊（光盤版）》電子雜志社有限公司、萬方數(shù)據(jù)電子出版社、北京萬方數(shù)據(jù)股份有限公司有權(quán)保留本人所送交學位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的一致內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相。除在保密期內(nèi)的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布（包括以

4、電子信息形式刊登）論文的全部內(nèi)容或中、英文摘要等部分內(nèi)容。論文的公布（包括以電子信息形式刊登）授權(quán)東南大學研宄生院辦理。研究生簽名辦本名為師簽重７又摘要正常體重、超重和肥胖兒童腸道菌群差異研究摘要本研究運用高通量測序技術(shù)對正常體重、超重和肥胖兒童腸道微生物的16SrDNA進行測序，比較其微生物群落的物種多樣性和群落組成差異；應用實時熒光定量PCR技術(shù)對三組兒童腸道內(nèi)的直腸真桿菌、多形擬桿菌、雙歧桿菌屬和乳酸桿菌進行特異性擴增，比較它們在不同體重兒童腸道中的數(shù)量差異。結(jié)合以上兩部分研究，形成對肥胖兒童腸道微生態(tài)結(jié)構(gòu)的全面認識，分析肥胖兒童腸道菌群變化特點，探索腸道菌群與肥

5、胖的關(guān)系，以期為通過調(diào)節(jié)腸道菌群防治肥胖提供理論依據(jù)。目的：1.比較正常體重、超重和肥胖兒童腸道菌群物種多樣性和群落構(gòu)成，分析不同體重兒童腸道菌群是否存在差異性。2.比較正常體重、超重和肥胖兒童腸道中直腸真桿菌、多形擬桿菌、雙歧桿菌屬和乳酸桿菌數(shù)量，分析不同體重兒童腸道中這些種屬的數(shù)量差異。方法：1.采集30例正常體重、35例超重和35例肥胖兒童糞便并提取DNA，然后對16SrDNAV4區(qū)進行擴增，使用Illumina-HiSeq高通量測序平臺進行測序，運用生物信息學技術(shù)對結(jié)果進行分析，比較三組菌群豐度和物種多樣性，尋找組間有顯著差異的物種。2.采集54例正常體重、53例超重和59

6、例肥胖兒童糞便并提取DNA，根據(jù)待測菌的16SrDNA基因序列設(shè)計四種菌的特異性引物，進行實時熒光定量PCR反應，比較三組間四種菌的數(shù)量有無差異。結(jié)果：1.通過高通量測序，三組共獲得了4320570條優(yōu)質(zhì)序列。Alpha多樣性分析結(jié)果表明，三組的多樣性指數(shù)中observed_species、Chao1指數(shù)和PDwholetree組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)在不同體重組間的差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Beta多樣性分析結(jié)果表明，正常體重和肥胖兒童腸道菌群組成差異顯著（P＜0.05），而超重與正常體重和肥胖兒童腸道菌群結(jié)構(gòu)組成差

7、異較?。≒＞0.05）。具體來看，單型擬桿菌（Bacteroidesuniformis）、擬桿菌門S24-7科、霍爾德曼氏菌（Holdemania）、吉利蒙德(氏)顫螺菌（Guilliermondii）、克里斯滕森氏菌屬（Christensenella）、消化鏈球菌科（Peptostreptococcaceae）、巨球型菌屬（Megasphaera）、梭菌屬（Clostridium）、哈氏梭菌（Clostridiumhathewayi）、厭氧棍狀菌屬（Anaerotr