雞減蛋性病毒病四聯(lián)油乳劑滅活疫苗的研制與應(yīng)用

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1、大會(huì)發(fā)言雞減蛋性病毒病四聯(lián)油乳劑滅活疫苗的研制與應(yīng)用’丁伯良，那明華，王英珍，李秀麗，張健，侯慶云，王東，張莉(天津市畜牧獸醫(yī)研究所，300112)〔摘要〕選用雞新城疫病毒Lasota株、雞傳染性支氣管炎M41株、雞減蛋綜合征病毒EDS=-AV,z,株及禽流感H，亞型6s等四株作為制苗用毒種，采用中空纖維超濾濃縮技術(shù)，研制成四聯(lián)油乳劑滅活疫苗，進(jìn)行物理性狀、安全性、免疫和效力檢驗(yàn)及疫苗保存期試驗(yàn)，并在天津及河北等地進(jìn)行田間應(yīng)用試驗(yàn)，共免疫蛋雞18萬羽份，免疫期達(dá)6個(gè)月，免疫保護(hù)率達(dá)95。〔關(guān)扭詢〕新城疫，傳染性支氣管炎，減蛋綜合征，禽流感，毒株;四聯(lián)滅活疫苗近年來，隨著我國(guó)家禽生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大和

2、飼養(yǎng)1.1毒種雞新城疫病毒(NDV)Lasota株、雞新城疫量的增加，使家禽疫病日益增多，一些重要疫病如雞強(qiáng)毒F,,E。株、雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)M=株、新城疫(ND)、傳染性支氣管炎(IB)、減蛋綜合征雞減蛋綜合征病毒(EDSV)EDS,6-AV,z，株，均由(EDS)和禽流感(AI)等引起雞呼吸道炎癥和蛋雞中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供;禽流感病毒(AIV)(H。亞型)減蛋的病毒性疾病造成的損失也越來越大。疫病的Ss株由本課題組分離鑒定和保存。增多和頻繁發(fā)生，迫使人們?cè)诩仪蒿曫B(yǎng)中過多地使1.2血清ND,IB陽性血清和陰性血清購(gòu)自中國(guó)獸用疫苗。藥監(jiān)察所;EDS,AI(H9)陽性血清和陰性血清購(gòu)自

3、疫苗免疫次數(shù)的增多，使疫苗接種已成為養(yǎng)禽中國(guó)農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所。業(yè)中較為繁重的工作之一。如何降低疫苗接種的工1.3試驗(yàn)動(dòng)物及雞/鴨胚1一2月齡非免疫羅曼雛作量以及對(duì)家禽的應(yīng)激反應(yīng)，受到人們?cè)絹碓蕉嗟碾u、9-11日齡非免疫雞胚均由天津市大良莊種雞關(guān)注。多聯(lián)疫苗由于具有一針防多病的效果，成倍地場(chǎng)提供;10-11日齡易感鴨胚，由天津市寶低某鴨減少了疫苗接種人員的工作量，最為引人注目。目場(chǎng)提供;9-11日齡SPF雞胚，購(gòu)自山東省農(nóng)科院家前，多聯(lián)疫苗的研究開發(fā)，已成為國(guó)內(nèi)外疫苗研究的禽研究所?！疅狳c(diǎn)之一。一’〕。然而，由于多聯(lián)疫苗需要較高的抗原1.4各種檢驗(yàn)用培養(yǎng)基及試劑各種檢驗(yàn)用培養(yǎng)基濃度，單純改

4、變疫苗乳化工藝中的油水比例以及通均為北京中海生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，7#礦物油由過改變病毒增殖條件提高病毒含量很難滿足多聯(lián)疫杭州煉油廠提供;司班一80、吐溫-80和硬脂酸鋁苗生產(chǎn)的需要，致使一些多聯(lián)疫苗產(chǎn)品單位體積疫等化學(xué)試劑均購(gòu)自天津天大化工廠。苗中抗原含量不足，存在免疫效果較差，免疫期短等1.5主要儀器設(shè)備中空纖維超濾器，天津工業(yè)大學(xué)問題。如何應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)解決多聯(lián)高效滅活疫苗生膜分離技術(shù)研究所生產(chǎn);膠體磨，沈陽新光機(jī)器廠產(chǎn)產(chǎn)中提高抗原濃度的問題，已成為多聯(lián)疫苗研究中品;均質(zhì)機(jī)，購(gòu)自上海華東均質(zhì)機(jī)廠。的關(guān)鍵技術(shù)之一〔毛一‘〕。1.6抗原的制備與濃縮本研究根據(jù)當(dāng)前我國(guó)禽病的發(fā)病特點(diǎn)和疫病防1.6

5、.1抗原的制備NDV,IBV,EDSV和AIV(H9)制的實(shí)際需要，針對(duì)性地開展雞減蛋性四聯(lián)(ND-均按常規(guī)方法，接種適齡非免疫雞胚或易感鴨胚，IB-EDS-AI)油乳劑滅活疫苗(簡(jiǎn)稱四聯(lián)苗)研究，371C孵育48-120h后，分別收獲雞胚/鴨胚尿囊液，解決生產(chǎn)實(shí)際中多聯(lián)疫苗缺乏和滅活疫苗穩(wěn)定性較采用微量法測(cè)定其對(duì)1%雞紅細(xì)胞的凝集價(jià)(HA差的問題，為天津及周邊地區(qū)當(dāng)前流行的家禽疫病價(jià))，IB病毒液用1%胰蛋白酶4℃處理過夜后再測(cè)的防制奠定基礎(chǔ)。定。同時(shí)進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，合格者置4℃保存?zhèn)溆谩?.6.2抗原的濃縮將收集的NDV,IBV和AIV1材料與方法(H9)尿囊液分別用無菌紗布過濾，應(yīng)用中空纖

6、維超.墓金項(xiàng)目:天津市重大科技攻關(guān)項(xiàng)目(003121241)作者簡(jiǎn)介:丁伯良(1948-)，男，研究員，博士，從事畜禽疫病診斷與防治研究一113—中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集濾器濃縮2-4倍，并采集樣品測(cè)定濃縮液中NDV,下注射1.5m1/只，觀察2周，注射疫苗部位應(yīng)無不IBV和AIV(H9)的HA效價(jià)。濃縮后病毒液中良反應(yīng)，且試驗(yàn)雞全部健活為合格。NDV,IBV和AIV(H9)對(duì)1%雞紅細(xì)胞的HA價(jià))1.8.6效力檢驗(yàn)將1月齡非免疫雛雞40只分成4lOlog2者為合格。組，每組10只，每只雞皮下或肌肉注射疫苗0.5m1,1.7病毒液的滅活與檢驗(yàn)同時(shí)設(shè)空白對(duì)照雞20只。2

7、8日后，第1,2組雞分別1.7.1病毒液的滅活將NDV,IBV和AIV(H9)濃用NDVF,,E。強(qiáng)毒和IBVM=強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊，觀察縮液和EDSV病毒液分別加人終濃度為0.2%的福14日，記錄發(fā)病、死亡與保護(hù)的雞數(shù)，同時(shí)每組設(shè)攻爾馬林溶液，37℃滅活24h，分別采集樣品進(jìn)行檢毒對(duì)照雞5只。第3,4組于免疫后28d，翅靜脈采驗(yàn)。血，分離血清，測(cè)定EDS,AIV(H，亞型)HI抗體，1.7.2無菌檢驗(yàn)