Ⅰ群禽腺病毒分離鑒定與通用PCR檢測及FAdV-4油乳劑滅活疫苗的研制

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2、mentoftheInactivatedOilEmulsionVaccineFAdV-4作者姓名：劉吉山專業(yè)：獸醫(yī)博士研究方向：獸醫(yī)技術服務指導教師：柳增善教授培養(yǎng)單位：動物醫(yī)學學院2018年6月＿ＰＣＲＦＡｄＶ－４Ｉ群禽腺病毒分離鑒定與通用檢測及油乳劑滅活疫苗的研制ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＵｎｉｖｅｒｓａｌＰＣＲＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＧｒｏｕｐＩＦｏｗｌＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅａｃｃｎｅＦＡｄＶ－４ＩｎａｃｔｉｖａｔｅｄＯｉｌＥｍｕｌｓｉｏｎＶｉ作者姓名：劉吉

3、山專業(yè)名稱：獸醫(yī)博士研宄方向：獸醫(yī)技術服務指導教師：柳增善教授學位類別：獸醫(yī)博士培養(yǎng)單位：動物醫(yī)學學院’論文答辯日期：２０１８年６月７日授予學位日期：年月日答辯委員會組成：姓名職稱工作單位主席錢愛東教授吉林農(nóng)業(yè)大學委員付殿國研宄員吉林省動物疫病預防控制中心王新平教授吉林大學于錄教授吉林大學彭其勝教授吉林大學劉明遠教授吉林大學丁壯教授吉林大學未經(jīng)本論文作者的書面授權，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個人，均不得對本論文、修改、的全部或部分內(nèi)容進行任何形式

4、的復制、發(fā)行出租、改編等有礙作者著作權的商業(yè)性使用（但純學術性使。否則。用不在此限），應承擔侵權的法律責任吉林大學博士（或碩士）學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學位論文，是本人在指導教師的指導下，獨立進行研宄工作所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研宄做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：如玄年Ｚ月■曰中文摘要Ⅰ群禽腺病毒分離鑒定與通用PCR檢測及FAdV-4油乳劑滅活疫苗的研制

5、采集山東省、江蘇省發(fā)病肉雞、蛋雞、麻鴨的病料，用SPF雞胚分離了14株FAdV毒株，病毒均不能凝集雞紅細胞，56℃、65℃處理30min后病毒失活，pH3與pH9條件下處理60min不完全失活，能夠抵抗4.4%體積的氯仿4℃處理10min；對Hexon蛋白部分基因進行測序分析與PCR-RELP定位病毒血清型，其中11株為FAdV-4血清型，其它3株分別為FAdV-8a、8b、11血清型；選擇FAdVA-E5個種12個血清型病毒DNA聚合酶基因高度同源序列設計引物，建立了一種理論上可通用檢測FAdV的PCR方法，具有敏感、特異、快速等特點，可檢測2.8×102拷貝及以上的病毒DNA，

6、對雞易感的DNA病毒EDSV、MDV、FPV檢測均為陰性，檢測陽性的新鮮病料均能分離到病毒，SPF雞感染病毒后心、肝、脾、肺、腎、腺胃與肌肉樣品檢測均為陽性；克隆了FAdV-4分離株Hexon蛋白基因，其ORF均為2814bp，編碼937個氨基酸，與已發(fā)布的4型病毒核苷酸、氨基酸序列高度同源，核苷酸序列同源性在97.1%~99.7%之間，氨基酸序列與PK-01株同源性高達99.8%，遺傳進化樹分析表明，我國流行的FAdV-4毒株分屬獨立的基因群體。選擇分離的4個血清型病毒回歸感染SPF雞，發(fā)病癥狀、剖檢病變與臨床病例一致，即表現(xiàn)為羽毛蓬亂、呆滯、雞冠蒼白，有的在2~4天后耐過恢復，

7、剖檢病死雞可見典型心包積水、包涵體肝炎、腎臟腫脹，部分呈現(xiàn)腺胃出血、肌胃潰瘍糜爛。將分離的FAdV-4病毒肌肉注射攻擊SPF雞，并測定病毒ELD50，結果表明，毒株致死率差異大，自40%到100%不等，ELD50同樣差異較大，高的達10-7.84ELD50/0.2mL，低的僅為10-5.0ELD50/0.2mL，根據(jù)SPF雞攻毒與ELD50測定結果，選擇FAdV-4-sdbc-1作為制備滅活疫苗的候選毒株。為進一步保持種子的純凈性與穩(wěn)定性，制備FAdV-4-sdbc-