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1、天CAT#:81102-30低溫運(yùn)輸，4℃保存凈沙系列石蠟包埋組織RNAOUTPETRNAOUT使用手冊(cè)V1.1北京天恩澤基因科技有限公司北京市海淀區(qū)上地信息路26號(hào)北京市留學(xué)人員海淀創(chuàng)業(yè)園中關(guān)村創(chuàng)業(yè)大廈506網(wǎng)址：www.tiandz.com；電話：400-6765278；電郵：order@tiandz.com產(chǎn)品及特點(diǎn)石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是由于它們的保存時(shí)間一般都比較長(zhǎng)，很不容易從中提取到可以進(jìn)行PCR的RNA，存在的主要問(wèn)題是RNA的降解和脫蠟過(guò)程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專門用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的
2、試劑，具有下列特點(diǎn)：1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。3.能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應(yīng)。4.即開(kāi)即用，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。規(guī)格及成分成份編號(hào)30次包裝溶液A81102A30mL溶液B81102B3mL溶液C81102C5mL溶液D81102D15mL微量核酸沉淀劑5090330mL（CAT#:50903-30）RNase-free水8040310mL使用手冊(cè)81102sc1份運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，4℃保存（溶液C需要-20℃
3、放置），有效期一年。自備試劑氯仿、75%乙醇。使用方法1.將5片厚度為6-8um的石蠟包埋組織切片轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管(最好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以最大速度振蕩10秒。2.加入75uL溶液B，在振蕩器上以最大速度振蕩10秒。3.7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個(gè)相，其中組織切片位于下相。4.小心吸棄上層液體。5.將離心管放入真空抽干機(jī)中抽干下層的液體，一般需要一小時(shí)。6.加入150uL溶液C，55℃保溫過(guò)夜。7.短暫離心，95℃保溫10分鐘。8.加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。9.加入0.1mL自備氯仿，
4、振蕩器上充分振蕩混均30秒。10.13000-5000×g室溫離心3-5分鐘。11.將上清液（約0.6mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相（藍(lán)色）和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可以留下100uL上清液不取。同時(shí)吸取上清時(shí)最好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見(jiàn)的DNA。12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。13.13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時(shí)間延長(zhǎng)到20或30分鐘。14.小心
5、吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。16.13000-15000g室溫離心1分鐘。17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。18.短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50uL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100uLRNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬(wàn)不要用真空離心法使RNA沉淀過(guò)于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。20.RNA完整性的電泳檢測(cè)：21.RNA產(chǎn)量產(chǎn)率
6、測(cè)定：將5-10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度（1OD260的RNA=40μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。22.RNA純度測(cè)定：無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。背景資料甲醛固定組織細(xì)胞的分子機(jī)制--蛋白質(zhì)部分關(guān)聯(lián)產(chǎn)品一步離心式石蠟清除降劑(CAT#:70302-100)
