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《瑟氏泰勒蟲感染牛外周血單個(gè)核細(xì)胞酵母雙雜交cDNA文庫構(gòu)建及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、畜牧與獸醫(yī)2015年第47卷第9期·65·氈欀欀欀欀欀氈欀欀欀欀獸醫(yī)欀瑟氏泰勒蟲感染的牛外周血單個(gè)核細(xì)胞酵母欀欀欀科技欀雙雜交cDNA文庫構(gòu)建及鑒定欀氈欀欀欀欀欀氈*董亮，張守發(fā)，許應(yīng)天，于龍政，李積旭，賈立軍，薛書江(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉133002)摘要:為了研究牛瑟氏泰勒蟲與牛外周血單個(gè)核細(xì)胞之間蛋白的相互作用，以自然感染瑟氏泰勒蟲的牛外周血單個(gè)核細(xì)胞為材料，純化并提取總ＲNA，應(yīng)用SMAＲT技術(shù)合成雙鏈cDNA(dscDNA)。利用純化柱純化dscDNA，并與線性化的pGADT7－Ｒec共轉(zhuǎn)化酵母菌Y187，以同
2、源重組8的方式在酵母細(xì)胞內(nèi)構(gòu)建牛外周血單個(gè)細(xì)胞的酵母雙雜交cDNA表達(dá)文庫。結(jié)果顯示，文庫容量為4.0×10CFU/mL，隨機(jī)挑取單克隆進(jìn)行菌落PCＲ檢測(cè)，插入的雙鏈cDNA片段大小集中在0.4～2.0kb，文庫重組率為95%。表明此文庫達(dá)到要求，可用于酵母雙雜交篩選。關(guān)鍵詞:瑟氏泰勒蟲;外周血單個(gè)核細(xì)胞;酵母雙雜交;cDNA文庫中圖分類號(hào):S855.9+1文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B文章編號(hào):0529－5130(2015)09－0065－04牛瑟氏泰勒蟲病是由經(jīng)蜱傳播的泰勒科、泰勒屬康發(fā)展的重要疾病之一。［4］的瑟氏泰勒蟲(Theileriase
3、rgenti)寄生于牛體內(nèi)引起酵母雙雜交技術(shù)是由Fields等在1989年首次的一種血液原蟲病，其主要臨床癥狀為高熱、消瘦、提出并初步建立的。由于具有高效性、方便性、快捷［1－2］貧血、出血和體表淋巴結(jié)腫大。據(jù)調(diào)查，該病在性和可在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，在誕生二十多年來已經(jīng)成為研外地引進(jìn)的牛和改良牛發(fā)病率可達(dá)45.2%～95%，究蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用的重要手段。如今，這一［3］在無任何治療的情況下其死亡率可達(dá)到90%。隨技術(shù)被越來越多的實(shí)驗(yàn)室所采用，自1999年到2011著養(yǎng)牛業(yè)的迅速發(fā)展和經(jīng)濟(jì)貿(mào)易的全球化，各國之間年每年使用到酵母雙雜交技術(shù)發(fā)
4、表的文獻(xiàn)都在500篇［5］品種牛以及牛類產(chǎn)品的交流日趨頻繁，牛瑟氏泰勒蟲以上，總共被引用26萬余次。目前，國內(nèi)外在牛病的流行區(qū)域正日益擴(kuò)大，已成為嚴(yán)重威脅養(yǎng)牛業(yè)健瑟氏泰勒蟲病的病原學(xué)和診斷技術(shù)等方面的研究雖然取得了一定進(jìn)展，但關(guān)于牛瑟氏泰勒蟲宿主互作蛋白收稿日期:2015－04－15［6－8］方面的研究還未見有報(bào)道?；痦?xiàng)目:國家自然基金項(xiàng)目(31460657);吉林省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)在酵母雙雜交技術(shù)平臺(tái)中，所構(gòu)建的酵母雙雜交業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助(201327);延邊大學(xué)博士啟動(dòng)基金cDNA文庫的內(nèi)容和質(zhì)量往往是整個(gè)研究的關(guān)鍵。外項(xiàng)目
5、周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，作者簡介:董亮(1990－)，男，碩士生，主要從事分子免疫學(xué)研究，E－mail:1157396419@qq.comPBMCs)的主要構(gòu)成有單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和樹突*通信作者:薛書江，講師，主要從事寄生蟲蛋白組學(xué)和免疫學(xué)細(xì)胞等。外周血單個(gè)核細(xì)胞的作用廣泛，可以增強(qiáng)免研究，E－mail:sjxue@ybu.edu.cn疫力，清除病原體，還是固有免疫和獲得性免疫的重櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔
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7、BiologyandE-［5］GuoS，SavolainenP，SuJetal．OriginofmitochondrialDNAdiver-volution，2013，30(12):2725－2729.sityofdomesticyaks［J］．BMCEvolutionaryBiology，2006，6［10］李齊發(fā)，趙興波．牦牛分類地位研究概述［J］．動(dòng)物分類學(xué)(1):73.報(bào)，2006，31(3):520－524.［6］HallTA．BioEdit:auser－friendlybiologicalsequencealignment
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