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《玉米葉片酵母雙雜交cdna文庫的構(gòu)建及評(píng)價(jià)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、維普資訊http://www.cqvip.com蕃北磨鹽學(xué)報(bào)2008，17(5)：162-165ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica玉米葉片酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及評(píng)價(jià)張軍杰，崔紅軍，黃玉碧(1．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，四川雅安625014；2．NJq農(nóng)業(yè)大學(xué)玉米研究所，四川雅安625014)摘要：以玉米骨干自交系478為試驗(yàn)材料，從各生長(zhǎng)時(shí)期的葉片中提取總RNA后，再利用磁珠法從中分離純化出mRNA，然后以mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，再在DNA聚合酶作用下，通過長(zhǎng)距離PCR，擴(kuò)增雙鏈cDNA(dscD
2、NA)。利用SMART技術(shù)，通過同源重組的方法，在酵母菌株AH109中構(gòu)建了玉米葉片全長(zhǎng)cDNA文庫。經(jīng)檢測(cè)，文庫的轉(zhuǎn)化率為1．54×10轉(zhuǎn)化子／3gpGADT7一Rec，文庫滴度為1．03×10pfu／mL，重組率為95。關(guān)鍵詞：玉米葉片；酵母雙雜交文庫；構(gòu)建中圈分類號(hào)：Q786文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004—1389(2008)05—0162—04ConstructionandAppreciationofYeastTwoHybridcDNALibraryofMaizeLeafZHANGJun—jie，CUIHong—jun。andHUANGYu-bi(1_Co
3、llegeofLifeScience，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan，625014，China；2．MaizeResearchInstitute，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan625014，China)Abstract：Themaizeinbredline478wasusedexperimentmateria1，andthetotalRNAwasisolatedfromeachperiodsofgrowthmaizeleafandmRNAwasseparateda
4、ndpurifiedusingtheSA—PMPsmethod．Afterwords，mRNAwasusedascyclostyleandsynthesizedtheprimacyeDNA．UnderDNApolymerasefunction，DNAwasexpanddoublestrandDNAbyusingLD-PCRapproach．UsingSMARTtechniqueandhomologousreorganizationmethod，theyeasttWOhybridcDNAlibrarywasconstructedinyeastAH109，Afterex
5、amination。the1ibraryconversionratewas1．54×10transfersbeggar／3gpGADT7一Rec，thecapacityofthelibrarywas1．03×10。pfu／mL，andthereorganizationratewas95．Keywords：Maize1eaf；YeasttWOhybridcDNAlibrary；Construction玉米是主要的糧食、飼料作物和工業(yè)原料，利產(chǎn)量及改善品質(zhì)提供理論依據(jù)[2]。但目前關(guān)于玉用酵母雙雜交技術(shù)建立玉米葉片的全長(zhǎng)cDNA米葉片酵母雙雜交全長(zhǎng)cDNA文庫的構(gòu)建還未
6、文庫對(duì)于研究玉米葉片蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)見報(bào)道，因此本試驗(yàn)通過利用SMART技術(shù)和同與RNA、蛋白質(zhì)與小分子等的相互作用有著重要源重組的方法，在酵母菌株AH109中構(gòu)建了玉的意義口]。同時(shí)，玉米葉片酵母雙雜交cDNA文米葉片全長(zhǎng)cDNA文庫，以葉片mRNA為模板，庫的構(gòu)建對(duì)于玉米葉片基因的克隆和功能鑒定具反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，在DNA聚合酶作用有十分重要的意義，有利于開展對(duì)玉米葉片光合下，通過長(zhǎng)距離PCR，擴(kuò)增雙鏈cDNA，純化的雙作用及其他生理機(jī)能的研究，從而為提高玉米的鏈cDNA與線性化pGADT7一Rec質(zhì)粒載體共同收稿日期：2008—03—03修回曰期
7、：2008—04—13基金項(xiàng)目：國家863計(jì)劃(SQ2007AA10Z135024)；四川省教育廳青年基金項(xiàng)目(2006B010)資助。作者簡(jiǎn)介：張軍杰(1974一)，男，山西臨汾人，講師，博士，從事玉米淀粉品質(zhì)研究。E-mail：malzestarchs@163．eom。*通訊作者：黃玉碧。E—mail：yubihuang@sina．com維普資訊http://www.cqvip.com5期張軍杰等：玉米葉片酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)化酵母菌株感受態(tài)AH109，經(jīng)胞內(nèi)同源重組形肚L20倍的SSC溶液(檸檬酸鈉和NaC1混合溶成環(huán)狀文庫質(zhì)粒，應(yīng)用營(yíng)養(yǎng)缺
