雙配體修飾殼聚糖藥物載體的合成及肝靶向性能研究

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1、分類號——UDC．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．密級學(xué)校代碼!鱧窆Z武多凄理歹大薯學(xué)位論文英文——SynthesisandLiverTargetingPerformanceof——題Et——Dual-ligandModifiedChitosanasaDrugCarrier一研究生姓名睦厘塑指導(dǎo)教師姓名———』立盜—一職稱—j蛆些L申請學(xué)位級別亟±學(xué)科專業(yè)名稱撾盤壟墨墨猩論文提交Et期2Q12生三旦論文答辯Et期2Q12生§月學(xué)位授予單位盍墊墨王盤鱟學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席評閱人2012年5月獨(dú)創(chuàng)性聲

2、明ltllllllllIllIllIlllY2100159本人聲明，所呈交的論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得武漢理工大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解武漢理工大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授

3、權(quán)武漢理工大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存或匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)經(jīng)武漢理工大學(xué)認(rèn)可的國家有關(guān)機(jī)構(gòu)或論文數(shù)據(jù)庫使用或收錄本學(xué)位論文，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)研究生(簽名)：硌．7辜否船師(簽名)：彳卉日期中文摘要目前，國內(nèi)外關(guān)于肝靶向給藥系統(tǒng)中藥物載體的研究主要集中在單配體修飾的載藥納米粒子方面。然而，單個(gè)配體修飾的納米粒子在進(jìn)行受體．配體相互作用時(shí)易受到許多病理及生理?xiàng)l件的變化而變化，這種變化會(huì)導(dǎo)致受體特異性識別能力和結(jié)合活性降低

4、，針對這種情況，本文提出了一種雙配體修飾的藥物載體材料，期望能提高主動(dòng)靶向的可靠性，豐富肝靶向給藥系統(tǒng)的內(nèi)容。本文將具有肝靶向性的配體甘草次酸(GA)和乳糖酸(LA)偶聯(lián)到殼聚糖(CTS)上，首次成功合成了雙配體修飾殼聚糖材料一乳糖酸化甘草次酸殼聚糖(GCGA)，該材料結(jié)構(gòu)未見文獻(xiàn)報(bào)道。通過MTT實(shí)驗(yàn)考察了材料的細(xì)胞毒性，并用FITC標(biāo)記的殼聚糖納米粒子(FITC．CTSNPs)、甘草次酸殼聚糖納米粒子(FITC．GA．CTSNVs)和GCGA納米粒子(FITC．GCGANPs)研究了GCGA肝靶向性能，并分析了GCGANPs

5、的主動(dòng)靶向機(jī)制。在中心復(fù)合設(shè)計(jì)研究中，優(yōu)化了GCGA／5．FuNPs的制備條件，探討了GCGA／5．FuNPs的體外釋放特性。得到如下結(jié)論：(1)紅外光譜(Ⅸ)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、接觸角測試和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GA和LA通過酰胺鍵成功連接到CTS，取代度分別為13．77m01％和16．74m01％；GCGA是一種親水性較強(qiáng)的具有疏水性GA基團(tuán)和親水性LA基團(tuán)的兩親性藥物載體材料，可通過自組裝法得到納米粒子；CJCGA對小鼠成纖維細(xì)胞的(L929)的毒性與其濃度的高低具有一定的關(guān)系，GCGA的濃度在0．005．0．

6、05mg／ml范圍內(nèi)時(shí)，無細(xì)胞毒副作用。(2)體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)ITC．GCGANPs進(jìn)入肝癌細(xì)胞和去唾液酸糖蛋白受體(ASGP．R)及甘草次酸受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用有關(guān)，當(dāng)一種受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用因某種病理生理原因受阻時(shí)，還有另一種配體．受體的相互作用，增加了細(xì)胞的攝取途徑；BEL．7402肝癌細(xì)胞攝取GCGA納米粒子的量是L02正常肝細(xì)胞的18．22倍，GCGA納米粒子對肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的親和性。大鼠體內(nèi)分布研究顯示，F(xiàn)ITC．GCGANPs對心、腦和骨骼肌沒有毒副作用，而且較FITC．CTSNPs和FITC．GA-C

7、TSNPs，F(xiàn)ITC．GCGANPs主要在大鼠肝臟富集，具有更強(qiáng)的肝靶向性。因此，GCGA可以作為一種有應(yīng)用前景的肝癌靶向性藥物載體材料。(3)中心復(fù)合設(shè)計(jì)優(yōu)化CTS載5．Fu納米粒子(CTS／5．FuNPs)的平均粒徑和載藥量，以及以此為模型，制備了GCGA／5．FuNPs，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：5-Fu／CTS對平均粒徑和載藥量具有顯著的影響；GCGA／5．FuNPs的形貌均呈圓整球形，平均粒徑為239．9nna(分布范圍在100．500rim)，分布均勻(多分散指數(shù)為0．04)，zeta電位為+21．2mV，載藥量為3．90％(

8、w／v)。GCGA／5．FuNPs體外釋放研究結(jié)果顯示，CrCGA／5．FuN．Ps在PBS緩沖溶液(pH=7．4)釋放過程大致分為四個(gè)階段，即突釋、緩釋、二次突釋，最后是一個(gè)非常緩慢的釋放階段。其緩釋效果明顯優(yōu)于純5．Fu，因此，GCGANPs作為藥物控釋系統(tǒng)中的納米藥物載