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《雙配體修飾殼聚糖納米粒肝癌細胞主動靶向給藥系統(tǒng)的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、聲明Y‘995348本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外．論文中不包含、其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果．也不包含為獲得四川大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料．與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意．。本學位論文成果是本人在四川大學讀書期間在導師指導下取得的，論文成操歸四川大學所有，特此聲明．’申請入：批傳、指導教師：弋芝吒秒氣四川大學博士學位論文雙配體修飾的殼聚糖納米粒肝癌
2、細胞主動靶向給藥系統(tǒng)的研究摘要博士研究生姚侍指導老師侯世祥教授肝癌是我國第二位惡性腫瘤，每年死亡人數(shù)約11萬人，占世界肝癌死亡人數(shù)的40％。因此，在我國對肝癌藥物治療方法進行深入的研究顯得更為必要。目前研究較熱的肝靶向給藥系統(tǒng)雖然提高了抗癌藥物在肝臟的濃度，降低了藥物對正常組織器官的毒副作用，卻多數(shù)無分辨正常肝細胞與癌變的肝細胞的能力，在殺死癌細胞的同時，也殺死了正常的肝細胞，給肝臟功能造成損傷，如能制備一可靶向至肝癌細胞的給藥系統(tǒng)，則可提高抗癌藥物在肝臟癌變部位的濃度，降低藥物對正常肝組織的毒副作用，
3、使藥效和治療指數(shù)進一步提高．’本課題選擇中藥抗癌有效成分白藜蘆醇為模型藥物，以殼聚糖(cS)為載體材料，制備殼聚糖納米粒(CS艚)，并在納米粒上連接配體生物素Biotin與抗生物素蛋白Avidin，得到雙配體修飾的納米粒A-B-CS-NP．Avidin的N末端含乙酰半乳糖氨和甘露耱殘基，通過與肝臟表面半乳糖和甘露糖受體的相互作用，Avidin可介導納米粒靶向至肝臟；Avidin與Biotin對癌細胞有特殊的親和力，兩個配體可進一步介導納米粒到達癌細胞，有望實現(xiàn)對肝癌細胞的主動靶向。為使配體Biotin順
4、利連接到CS上，采用沉淀法制備CS-NP。用單因素法優(yōu)化制備工藝，制得的白藜蘆醇殼聚糖納米粒(Rcs-CS．NP)包封率為65％，載藥量為13％。平均粒徑為300rim，多分散系數(shù)為0．254，體外釋放行為可用雙指數(shù)雙向動力學描述。沉淀法制備一般常用硫酸鈉溶液作為沉淀劑，制得的微粒粒徑多在lIm級；而本研究以氯化鈉溶液作為沉淀荊，使CS的氨基保持游離，微粒的粒徑達到gilt級，在制備工藝上具創(chuàng)新性。使用試劑Sulfo-NHS．Biotin與CS的氨基反應生成生物素化的殼聚糖Bio-CS，采用CS．NP的
5、制備工藝制得Biotin修飾的殼聚糖納米粒B-CS·NP：在B-CS-NP溶液中，利用Avidin與Biotin之間有很強的親和力，分別按Biotin：Avidin(2：1)及Biotin：Avidin(1：1)的比例加入Avidin溶液，得到Avldin與Biotin雙配體修飾的納米粒A．B．CS-NP及Avidin修飾的納米粒A-CS．NP。四川大學博士學位論文選用試劑盒，以HABA染料法成功地測定了包封白藜蘆醇的B-CS—NP及A-B-CS-NP表面Biotin的連接密度，以retoolsBiot
6、in，retoolsCS為單位，分別為2及1；含藥B￡S．NP平均粒徑為263rim，多分散系數(shù)為0．170；含藥A-8￡S-NP平均粒徑為319咖，多分散系數(shù)為O．155；兩種納米粒的包封率在65％左右，載藥量在ll％左右；體外釋放過程均符合雙指數(shù)雙向動力學方程。本部分研究選擇簡單的合成反應與結(jié)合途徑，在國際上率先將分別具有肝靶向及癌細胞靶向功能的配體Avidin與Biotin連接至CS-NP上，以彌補單一配體修飾載體對特定組織的特定細胞靶向能力的不足，增強給藥系統(tǒng)對肝臟癌細胞的特異性，并建立了相應的
7、質(zhì)量評價方法，構(gòu)思新穎、巧妙、嚴謹，具較強的創(chuàng)造性。在動物體內(nèi)分布研究中，以白藜蘆醇溶液為對照，采用HPLC法測定了各納米制劑經(jīng)小鼠尾靜脈注射后，不同時間點藥物的體內(nèi)分布情況。含藥CS．NP、B．CS-NP及A-B．CS．NP對肝臟的相對靶向效率分別為白鏨蘆醇對照溶液的2．29。1．66及2．54倍，表明Avidin配體的引入提高了納米粒對肝臟的靶向性，雙配體修飾的A．B．CS-NP具有明顯的肝靶向作用。利用已證實的Avidin對肝臟的主動靶向性，以Biotin作中介，將Avidin連接至納米粒上，以增
8、強納米粒對肝臟的靶向能力，此部分研究國內(nèi)外未見報道。用FITc標記納米粒，使用酶標儀定量考察了人肝癌HepG2細胞對納米粒的攝取情況。結(jié)果顯示，細胞對單配體及雙配體修飾的納米粒的攝取量明顯高于無配體修飾的納米粒CS-NP(P
