大菱鲆Scophthalmusmaximus遲緩愛(ài)德華氏菌病免疫防控研究

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1、TheimmunestrategyinpreventionofedwardsiellasisinturbotBy【ChongWang】ADissertation／ThesisSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofScience【InstituteofoceannolgychineseAcademyofScienceslApril，2013原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行

2、的研究工作及取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任人由本人承擔(dān)。論文作者簽名：日期：的陟s．∥學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解中國(guó)科學(xué)院海洋研究所有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意海洋研究所保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)科學(xué)院海洋研究所可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解

3、密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽導(dǎo)師簽字簽字日期：p”．o“磐魄砂參、f，／-致謝首先感謝在碩士期間一直悉心指導(dǎo)我、教育我的導(dǎo)師孫黎老師，在這里請(qǐng)?jiān)试S我向?qū)O老師表達(dá)最大的謝意!在實(shí)驗(yàn)室工作學(xué)習(xí)這段時(shí)間里孫老師不辭辛苦，不厭其煩的指導(dǎo)我的實(shí)驗(yàn)工作，不僅培養(yǎng)了我實(shí)驗(yàn)操作的能力，獨(dú)立思考的能力，更讓我明白了科研道路到底是一條什么樣的路，我們應(yīng)該以什么樣的態(tài)度去做科研。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過(guò)程中，孫老師，創(chuàng)新嚴(yán)謹(jǐn)?shù)乃枷氤蔀榱宋覍W(xué)習(xí)的榜樣，不斷的激勵(lì)著我向前進(jìn)步。在這里我還要感謝一直在我身邊支持我，鼓勵(lì)我，幫助過(guò)我的老師張敏，胡永華，遲恒，孫鉑光。師兄師姐周志俠，邱初，于蘭萍，孫云，靳

4、仁娉，陳玲，汪瑋，張寶存，張健，李墨非，龍昊，李永鑫，我的同門(mén)陳騁，賈盼盼，師弟張書(shū)仁，師妹張璐等。感謝各位師兄師姐在我實(shí)驗(yàn)遇到困難時(shí)能夠在我的身邊深切的給予指導(dǎo)。感謝同門(mén)，師弟師妹在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)我以幫助，你們的出現(xiàn)讓我的實(shí)驗(yàn)室生活變得輕松，愉悅。感謝大家出現(xiàn)在我的生活當(dāng)中，是你們的出現(xiàn)讓我的人生變得不再單調(diào)，是你們帶給了我生活的樂(lè)趣，讓我在偶爾單調(diào)的實(shí)驗(yàn)生活中得到了些許的歡聲笑語(yǔ)，謝謝各位。感謝舍友張帥，麻福斌在生活當(dāng)中對(duì)我的關(guān)照。感謝開(kāi)放室的各位老師對(duì)我開(kāi)題、中期考核的指導(dǎo)與幫助。感謝研究生部屠國(guó)華書(shū)記，武偉主任，宋彩鳳老師、遲杰老師、靳朝暉老師等各位老師在研

5、究生學(xué)習(xí)期間，給予了我莫大的幫助，對(duì)此我表示真摯的感謝。同時(shí)在這里我還要特別感謝在我生活當(dāng)中一直以來(lái)支持我關(guān)心我的同學(xué)，李玉宏同學(xué)。感謝我的家人和朋友對(duì)我的關(guān)心支持與幫助。此外向在文中未提及的，幫助過(guò)我的同學(xué)和朋友們，一并致謝。摘要大菱鲆(Scophthalmusmaximus)遲緩愛(ài)德華氏菌病免疫防控研究遲緩愛(ài)德華氏菌(Edwardsiellatarda)是海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)中的重要病原菌，其所導(dǎo)致的遲緩愛(ài)德華氏菌病(edwardsiellasis)每年給海水養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。針對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌病的頻繁爆發(fā)，本論文嘗試構(gòu)建和篩選了兩類(lèi)疫苗分別為亞單位疫苗rFi

6、ma以及無(wú)毒株二價(jià)活疫苗P1V3來(lái)對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌病進(jìn)行有效的預(yù)防及治療。首先通過(guò)in．frame基因敲除技術(shù)構(gòu)建了遲緩愛(ài)德華氏菌致病性菌株TX01的fmA缺失突變株TXfimA，與TX01相比，TXfimA在生物膜形成、侵染魚(yú)類(lèi)組織、吸附和侵入宿主外周血淋巴細(xì)胞等方面的能力均顯著下降。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，．聲蒯是遲緩愛(ài)德華氏菌的一個(gè)重要毒力因子。為檢測(cè)FimA的免疫原性，我們體外表達(dá)并純化了重組FimA(rFimA)，將rFimA作為亞單位疫苗免疫大菱鲆。攻毒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)免疫后的大菱鲆能抵御遲緩愛(ài)德華氏菌的侵染(相對(duì)免疫保護(hù)率為70．2％)，這表明rFimA是一個(gè)具有

7、較高免疫保護(hù)效率的亞單位疫苗。此外我們發(fā)現(xiàn)rFimA對(duì)弧菌幾乎沒(méi)有免疫保護(hù)效應(yīng)(相對(duì)免疫保護(hù)率為3．3％)，但它卻能顯著提高哈氏弧茵亞單位疫苗rVhhP2的免疫保護(hù)效應(yīng)，這一現(xiàn)象表明rFimA同時(shí)具有佐劑的效應(yīng)。綜上所述，F(xiàn)imA是遲緩愛(ài)德華氏菌的一個(gè)重要毒力因子，rFimA具有佐劑的效應(yīng)同時(shí)具有作為亞單位疫苗應(yīng)用的潛力。為解決亞單位疫苗應(yīng)用的局限性，本論文篩選了針對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌和弧菌的具有交叉保護(hù)效應(yīng)的的浸泡疫苗和口服疫苗。首先從青島附近海域中篩選到2種無(wú)毒株P(guān)1SW和V3SW，經(jīng)16sRNA測(cè)序分析，P1SW和V3SW分別屬于假單胞菌屬和弧菌屬，通過(guò)口服加浸

8、泡的方式制