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1、第三節(jié) 殺菌劑的毒力測定和 田間藥效試驗一、毒力測定殺菌劑對病菌的毒力是指藥劑本身對病原菌直接作用的性質(zhì)和程度，它是在嚴(yán)格控制條件下測定的，常用有效中量（ED50）表示，是指抑制50%病菌孢子萌發(fā)所需的劑量或有效中濃度（EC50）。殺菌劑的毒力測定方法很多，長期采用經(jīng)典的離體平板法，即以孢子萌發(fā)，抑制孢子發(fā)芽率或菌絲生長、變色、變形等指標(biāo)作為毒力衡量的標(biāo)準(zhǔn)。但近代隨著新型內(nèi)吸殺菌劑的發(fā)展，對殺菌劑的生物篩選逐漸由經(jīng)典的離體篩選趨向活體篩選。因為它不僅模擬田間實際，同時可以防止那些在離體平板上無效，而必須在植物活體上方顯示活
2、性的化合物漏篩。但活體篩選涉及的因素較多，對寄主植物、試驗條件要求較高，如光照、濕度、溫度，為控制病原菌與寄主相互作用的條件，必須有適合的溫室，費(fèi)工耗資都較大。離體測定能反映化合物毒力的本質(zhì)和程度，方法簡便，為研制新農(nóng)藥不可缺少，但它存在有一點(diǎn)缺點(diǎn)，應(yīng)該和溫室活體的盆栽試驗結(jié)合起來。1.毒力測定的方法室內(nèi)離體平板法：（1）孢子萌發(fā)測定法（2）抑菌圈法（3）生長速率測定法（1）孢子萌發(fā)測定法有載玻片萌發(fā)法及平板培養(yǎng)基培養(yǎng)法。即將不同的藥液噴布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子懸浮液，藥液與懸浮液接觸后，經(jīng)一定培育時間，鏡檢孢子
3、萌發(fā)的百分率，載玻片法適合于水溶性較好的保護(hù)劑，能計算單位面積藥液的沉積量及藥液濃度，接近實際條件，但對萌發(fā)時需氧較多的病原菌不適用。平板萌發(fā)適用于不易分解的保護(hù)劑，根據(jù)測定對象生長需要的配方來制備合適的培養(yǎng)基，由于孢子在培養(yǎng)基的表面能得到較充足的空氣，萌發(fā)時不致因缺少氧而受影響。（2）抑菌圈法廣泛地應(yīng)用于真菌細(xì)菌的殺菌劑篩選，基本原理是將病原菌孢子或菌絲的懸浮液與瓊脂培養(yǎng)基混勻冷凝后，在培養(yǎng)基平面放上消毒的并蘸有不同濃度藥劑的圓形濾紙片（直徑6mm）左右，或放特制的直徑8mm高10mm的不銹鋼環(huán)，將配好的藥液定量加在鋼環(huán)
4、內(nèi)，經(jīng)定溫培養(yǎng)一定時間后，由于藥劑的擴(kuò)散作用，使病菌生長受到抑制，即形成“抑菌圈”。測量抑菌圈的大小，以比較殺菌劑的毒力。（3）生長速率測定法即在瓊脂培養(yǎng)基中加入藥液，冷凝后接菌的方法，用木塞鉆孔器切取正常培養(yǎng)基上的供試菌絲體，放在平板上（也稱菌碟），經(jīng)一定時間后觀察測量菌落生長速率，一定時間菌落直徑的長度與對照組比較，求出抑制百分率，繪濃度對數(shù)---抑制百分率毒力曲線圖，以ED50來比較毒力程度。平板測定是室內(nèi)殺菌劑活性測定最常用的方法，優(yōu)點(diǎn)是條件比較一致，影響因子比較單一，活性效應(yīng)顯現(xiàn)較快，缺點(diǎn)是有時與活體測定結(jié)果不一
5、致，有時會漏篩或誤篩，如用粉銹寧處理大麥白粉病菌，離體測定不僅分生孢子能萌發(fā)且能形成吸器，但此藥在活體上卻表現(xiàn)高效。所以初篩手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原---寄主植物組合法。2．盆栽方法在溫室內(nèi)進(jìn)行的，具體方法隨各種不同病害而異，例：小麥赤霉病采用分生孢子---幼苗組合法，根據(jù)殺菌劑物不同作用機(jī)理，有測定以下作用的方法。（1）保護(hù)作用；（2）治療作用；（3）內(nèi)吸作用。（1）保護(hù)作用：一般經(jīng)定量噴霧法處理供試植物，噴藥后間隔一定的時間再接種（方法很多，如多針接種，剪葉法或?qū)⒕z塊貼在葉片上等），保持發(fā)病所需的溫、濕度
6、條件，發(fā)病后再按病情分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)計，以病葉率，病情指數(shù)增長等指標(biāo)判斷藥效。（2）治療作用：測定方法是先在植株上接菌，保溫，保濕一定時間，待病菌菌絲侵入或始見發(fā)病，再進(jìn)行噴藥處理，其他調(diào)查統(tǒng)計方法同上。（3）內(nèi)吸作用：測定根的內(nèi)吸輸導(dǎo)試驗，可以采用水培的稻株或棉株，在營養(yǎng)液中加定量的藥劑，待24h或48h后進(jìn)行接菌，發(fā)病后調(diào)查，若以土培盆栽方法，則藥液定量灌入土中，程序與上相同。持效期的試驗：以上各種方法，用先噴藥后接菌或先接菌后噴藥，間隔不同日期進(jìn)行處理，可以測定殺菌劑殘效。剪葉法分級標(biāo)準(zhǔn)：0級（不發(fā)?。?級（＜剩余葉
7、面1/4）；2級（剩余葉面1/4-1/2）；3級（＞剩余葉面1/2）；4級（全部發(fā)?。６?、有效中量的測定采用一系列的藥劑劑量或濃度，每一劑量或濃度可以得出一個相應(yīng)的孢子抑制百分率，得到兩組數(shù)據(jù)，然后把各劑量換算成對數(shù)值，將抑制百分率換算成幾率值，將換算后的5對數(shù)據(jù)建立回歸方程，在直坐標(biāo)系中畫出回歸直線，此直線稱為劑量對數(shù)---抑制百分率幾率值直線（ED-P-line直線）。抑制百分率=50%，機(jī)率值=5將5代入回歸方程，然后求其反對數(shù)，即LD-P-Line（劑量對數(shù)---機(jī)率值直線）。ED50可以作為多種藥劑對同一病菌等
8、效劑量的毒力比較，在一定的范圍內(nèi)可以用它來衡量一種藥劑對病原菌毒力的大小，但不能做為田間防治的實際指標(biāo)。三、田間試驗室內(nèi)篩選的藥劑必須進(jìn)行田間試驗，通過試驗確定其藥效的好壞，經(jīng)濟(jì)效益的高低，也就是說，田間試驗是確定一種藥劑在生產(chǎn)上有無實用價值的主要方法。田間實驗的具體方法可參考《農(nóng)藥藥效試驗的設(shè)計與分析
