殺菌劑的毒力測(cè)定和

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1、第三節(jié)殺菌劑的毒力測(cè)定和田間藥效試驗(yàn)一、毒力測(cè)定殺菌劑對(duì)病菌的毒力是指藥劑本身對(duì)病原菌直接作用的性質(zhì)和程度，它是在嚴(yán)格控制條件下測(cè)定的，常用有效中量（ED50）表示，是指抑制50%病菌孢子萌發(fā)所需的劑量或有效中濃度（EC50）。殺菌劑的毒力測(cè)定方法很多，長(zhǎng)期采用經(jīng)典的離體平板法，即以孢子萌發(fā)，抑制孢子發(fā)芽率或菌絲生長(zhǎng)、變色、變形等指標(biāo)作為毒力衡量的標(biāo)準(zhǔn)。但近代隨著新型內(nèi)吸殺菌劑的發(fā)展，對(duì)殺菌劑的生物篩選逐漸由經(jīng)典的離體篩選趨向活體篩選。因?yàn)樗粌H模擬田間實(shí)際，同時(shí)可以防止那些在離體平板上無(wú)效，而必須在植物活體上

2、方顯示活性的化合物漏篩。但活體篩選涉及的因素較多，對(duì)寄主植物、試驗(yàn)條件要求較高，如光照、濕度、溫度，為控制病原菌與寄主相互作用的條件，必須有適合的溫室，費(fèi)工耗資都較大。離體測(cè)定能反映化合物毒力的本質(zhì)和程度，方法簡(jiǎn)便，為研制新農(nóng)藥不可缺少，但它存在有一點(diǎn)缺點(diǎn)，應(yīng)該和溫室活體的盆栽試驗(yàn)結(jié)合起來(lái)。1.毒力測(cè)定的方法室內(nèi)離體平板法：（1）孢子萌發(fā)測(cè)定法（2）抑菌圈法（3）生長(zhǎng)速率測(cè)定法（1）孢子萌發(fā)測(cè)定法有載玻片萌發(fā)法及平板培養(yǎng)基培養(yǎng)法。即將不同的藥液噴布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子懸浮液，藥液與懸浮液接觸后，經(jīng)一

3、定培育時(shí)間，鏡檢孢子萌發(fā)的百分率，載玻片法適合于水溶性較好的保護(hù)劑，能計(jì)算單位面積藥液的沉積量及藥液濃度，接近實(shí)際條件，但對(duì)萌發(fā)時(shí)需氧較多的病原菌不適用。平板萌發(fā)適用于不易分解的保護(hù)劑，根據(jù)測(cè)定對(duì)象生長(zhǎng)需要的配方來(lái)制備合適的培養(yǎng)基，由于孢子在培養(yǎng)基的表面能得到較充足的空氣，萌發(fā)時(shí)不致因缺少氧而受影響。（2）抑菌圈法廣泛地應(yīng)用于真菌細(xì)菌的殺菌劑篩選，基本原理是將病原菌孢子或菌絲的懸浮液與瓊脂培養(yǎng)基混勻冷凝后，在培養(yǎng)基平面放上消毒的并蘸有不同濃度藥劑的圓形濾紙片（直徑6mm）左右，或放特制的直徑8mm高10mm的不

4、銹鋼環(huán)，將配好的藥液定量加在鋼環(huán)內(nèi)，經(jīng)定溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，由于藥劑的擴(kuò)散作用，使病菌生長(zhǎng)受到抑制，即形成“抑菌圈”。測(cè)量抑菌圈的大小，以比較殺菌劑的毒力。（3）生長(zhǎng)速率測(cè)定法即在瓊脂培養(yǎng)基中加入藥液，冷凝后接菌的方法，用木塞鉆孔器切取正常培養(yǎng)基上的供試菌絲體，放在平板上（也稱菌碟），經(jīng)一定時(shí)間后觀察測(cè)量菌落生長(zhǎng)速率，一定時(shí)間菌落直徑的長(zhǎng)度與對(duì)照組比較，求出抑制百分率，繪濃度對(duì)數(shù)---抑制百分率毒力曲線圖，以ED50來(lái)比較毒力程度。平板測(cè)定是室內(nèi)殺菌劑活性測(cè)定最常用的方法，優(yōu)點(diǎn)是條件比較一致，影響因子比較單一，活

5、性效應(yīng)顯現(xiàn)較快，缺點(diǎn)是有時(shí)與活體測(cè)定結(jié)果不一致，有時(shí)會(huì)漏篩或誤篩，如用粉銹寧處理大麥白粉病菌，離體測(cè)定不僅分生孢子能萌發(fā)且能形成吸器，但此藥在活體上卻表現(xiàn)高效。所以初篩手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原---寄主植物組合法。2．盆栽方法在溫室內(nèi)進(jìn)行的，具體方法隨各種不同病害而異，例：小麥赤霉病采用分生孢子---幼苗組合法，根據(jù)殺菌劑物不同作用機(jī)理，有測(cè)定以下作用的方法。（1）保護(hù)作用；（2）治療作用；（3）內(nèi)吸作用。（1）保護(hù)作用：一般經(jīng)定量噴霧法處理供試植物，噴藥后間隔一定的時(shí)間再接種（方法很多，如多針接種

6、，剪葉法或?qū)⒕z塊貼在葉片上等），保持發(fā)病所需的溫、濕度條件，發(fā)病后再按病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以病葉率，病情指數(shù)增長(zhǎng)等指標(biāo)判斷藥效。（2）治療作用：測(cè)定方法是先在植株上接菌，保溫，保濕一定時(shí)間，待病菌菌絲侵入或始見(jiàn)發(fā)病，再進(jìn)行噴藥處理，其他調(diào)查統(tǒng)計(jì)方法同上。（3）內(nèi)吸作用：測(cè)定根的內(nèi)吸輸導(dǎo)試驗(yàn)，可以采用水培的稻株或棉株，在營(yíng)養(yǎng)液中加定量的藥劑，待24h或48h后進(jìn)行接菌，發(fā)病后調(diào)查，若以土培盆栽方法，則藥液定量灌入土中，程序與上相同。持效期的試驗(yàn)：以上各種方法，用先噴藥后接菌或先接菌后噴藥，間隔不同日期進(jìn)行處理

7、，可以測(cè)定殺菌劑殘效。剪葉法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)（不發(fā)?。?；1級(jí)（＜剩余葉面1/4）；2級(jí)（剩余葉面1/4-1/2）；3級(jí)（＞剩余葉面1/2）；4級(jí)（全部發(fā)?。?。二、有效中量的測(cè)定采用一系列的藥劑劑量或濃度，每一劑量或濃度可以得出一個(gè)相應(yīng)的孢子抑制百分率，得到兩組數(shù)據(jù)，然后把各劑量換算成對(duì)數(shù)值，將抑制百分率換算成幾率值，將換算后的5對(duì)數(shù)據(jù)建立回歸方程，在直坐標(biāo)系中畫(huà)出回歸直線，此直線稱為劑量對(duì)數(shù)---抑制百分率幾率值直線（ED-P-line直線）。抑制百分率=50%，機(jī)率值=5將5代入回歸方程，然后求其反對(duì)數(shù)，即LD

8、-P-Line（劑量對(duì)數(shù)---機(jī)率值直線）。ED50可以作為多種藥劑對(duì)同一病菌等效劑量的毒力比較，在一定的范圍內(nèi)可以用它來(lái)衡量一種藥劑對(duì)病原菌毒力的大小，但不能做為田間防治的實(shí)際指標(biāo)。三、田間試驗(yàn)室內(nèi)篩選的藥劑必須進(jìn)行田間試驗(yàn)，通過(guò)試驗(yàn)確定其藥效的好壞，經(jīng)濟(jì)效益的高低，也就是說(shuō)，田間試驗(yàn)是確定一種藥劑在生產(chǎn)上有無(wú)實(shí)用價(jià)值的主要方法。田間實(shí)驗(yàn)的具體方法可參考《農(nóng)藥藥效試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與分析》一