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《茶樹(shù)多酚氧化酶基因的克隆及其序列比較》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、茶葉科學(xué)2001,21(2):94-98JournalofTeaScience文章編號(hào):1000-369X(2001)02-0094-05茶樹(shù)多酚氧化酶基因的克隆及其序列比較趙東,劉祖生,奚彪(浙江大學(xué)農(nóng)學(xué)院茶學(xué)系,浙江杭州310029)摘要:根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的多酚氧化酶基因中的保守序列,設(shè)計(jì)兼并引物,利用nest-PCR技術(shù),首次克隆了茶樹(shù)多酚氧化酶基因。該基因已經(jīng)在GenBank上登錄,登錄號(hào)為AF269192。序列分析表明,茶樹(shù)多酚氧化酶基因與其它植物中的多酚氧化酶基因有較高的相似性,尤其在銅離子結(jié)合部位,所有的植
2、物基本上一致。進(jìn)化樹(shù)分析表明,茶樹(shù)的多酚氧化酶可以與大多數(shù)的木本植物聚合成一個(gè)組。關(guān)鍵詞:茶樹(shù);多酚氧化酶;基因;克隆中圖分類號(hào):S5711;Q785文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:ACloningandAlignmentofPolyphenolOxidasecDNAofTeaPlantZHAODong,LIUZu_sheng,XIBiao(DepartmentofTeaScience,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,China)Abstract:Forthefirsttimethepolyphenolo
3、xidase(PPO)geneinteaplant(Camelliasinensis(L.)O.Kuntze)wascloned,duringwhich,theconsensussequencesofpreviouspublishedPPOwereusedtodesignthedegenerateprimersandreversetranscriptionbyusingnest_PCRmethod.TheobtainedPPOgeneofteaplantwasregisteredinGenBank,whoseaccessnumbe
4、risAF269192.AlignmentofsequenceswithClustalWindicatesthatthePPOgeneofteaplanthashighhomologywiththosefoundinotherplants,especiallycopperbindingregions.Thepolyphenoloxidaseoftheteaplantcanbeclusteredinthesamegroupwithmostotherwoodyplantsaccordingtophylogenetictreeanaly
5、sis.Keywords:Teaplant(Camelliasinensis(L.)O.Kuntze);Polyphenoloxidase(PPO);Gene;Cloning植物多酚氧化酶(PPOs)是含銅的金屬蛋多酚氧化酶對(duì)茶葉的品質(zhì)影響很大,并且不[1、2]白,由核基因編碼,可能僅存在于質(zhì)體中。同類型的茶葉要求不同活性的多酚氧化酶。紅茶雖然從1895年就開(kāi)始有了多酚氧化酶的研究報(bào)要求較高的酶活性,使得多酚類氧化生成紅茶特[3]告,但其在植物組織中的功能并未充分了解。有的色澤和香味。而綠茶則要求較低的酶活性,隨著分子生物學(xué)的
6、發(fā)展,多酚氧化酶研究也進(jìn)入減少多酚類的氧化,以保持茶葉的綠色和鮮爽的了分子生物學(xué)階段。通過(guò)近十年的研究,已有十特點(diǎn)。因而多酚氧化酶活性的高低直接影響到綠余種植物的多酚氧化酶基因被克隆。它們包括西茶和紅茶的品質(zhì)。但通過(guò)傳統(tǒng)的方法難以對(duì)酶活[4、5][6][7、8][9]紅柿、蠶豆、馬鈴薯、葡萄、波性進(jìn)行有效的調(diào)控,如果能通過(guò)生物技術(shù)控制多[10][11][12、13][14]菜、美洲商陸、蘋果、甘蔗、煙酚氧化酶的活性,使其能按人們的要求和茶類特[15][16][17][17][17]草、杏、日本梨、梨、桃、日本點(diǎn)進(jìn)行表達(dá),則將大大促
7、進(jìn)茶學(xué)的基礎(chǔ)研究和茶[17][17][18]枇杷、中國(guó)溫、populusgenerosa、番葉生產(chǎn)。我們的研究希望能克隆茶樹(shù)的多酚氧化薯(Hashimoyoetal,2000登錄)。從已經(jīng)克隆的酶基因,了解其序列的特點(diǎn),以便能進(jìn)一步對(duì)其多酚氧化酶基因來(lái)看,它們均屬于基因家族,多進(jìn)行遺傳操作,以調(diào)控其活性。則6-7個(gè)基因,少則2-3個(gè)。這些基因的表達(dá)1材料和方法具有時(shí)空差異和組織特異性,表明其在植物中所起的作用有所不同。11材料收稿日期:2001-07-16修訂日期:2001-08-14基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目
8、(39770475)作者簡(jiǎn)介:趙東(1963-),男,安徽蕪湖人,農(nóng)學(xué)博士,主要從事茶樹(shù)遺傳育種和分子生物學(xué)的教學(xué)和研究。2期趙東等:茶樹(shù)多酚氧化酶基因的克隆及其序列比較95試驗(yàn)所用的茶樹(shù)品種為種植于本系華家池茶T4DNA連接酶1l,加水至10
