茶樹中csecgt基因的克隆及其功能驗證

《茶樹中csecgt基因的克隆及其功能驗證》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、；＂．．－：．Ｖ、＇．；，護ｉ誦讀，謙ｒｖＶ．Ｖ－＇：．峨奠＾．霉ｉＶ寅．ｒＶ塑．ｉ譯ｒ１＇．．．ｉ＇．‘ｆｃ－－＾；＇．－＇讓Ｆｚ／’／．杰＾＾ｆ＾ｙ：ｖ．＼貢ｄ學位論＾．＾；：．忡旅Ｇ細的體娜功能驗Ｅ．ｒ．．研論名吳超一．括巧巧教師黃救教冊ｉ？；掘魏‘，韓學專處茶學一‘ｌ‘議＇縣養(yǎng)研方向瓣４Ｉ補Ｉ、籠３Ｖｔ品ｉ養(yǎng)３ｉ裹養(yǎng)著議義＞ｒ，妖’議襲一疑；義攘ｌ劈ｌ．；誦駕＇：ｌ京．ｊ．§．這故月．．Ｔ．

2、ｉ＼＼，．，－：：，ｒ，；；、－ｒ＇、－．：－？ｃｖ＾，；：，－ｖｖ；Ｖｒ－’＼Ｖ，－．＇．、‘．．ＶＶ＾分類號Ｓ５７１．１密級公開ＵＤＣ單位代碼１０５３７觸齋農皮丈＃碩±學位論文茶樹中ＣｓＥＣＧＴ基因的克隆及其功能驗證ＣｌｏｎｉｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＣｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎｏｆＣｓＥＣＧ了ｇＧｅｎｅｉｎＣａｍｅｌｌｉａＳｉｎｅｎｓｉｓ研究生姓名吳敦超指導教師黃建安教授副指導教

3、師劉仲華教榜學科專業(yè)塞拳研究方向茶樹栽培育種與分子牛物學論文答辯日期２饑Ｓ自仙答辯委員會主席喻所年論義評閱人舊畜潘！、苗位授予日期胃二０—五年六月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在指導教師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所化除了文中特別加Ｗ標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得湖南農業(yè)大學或其它教育機構的學位或巧一書而使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示

4、了謝意。口Ｓ｜研究生簽名：時間：么！年月曰裏％ｉ堯！６７關于論文使用授權的說明本人完全了解湖南農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即；學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意湖南農業(yè)大學可巧用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容，并同意將由此產生的收益捐贈給學校教育基金會用于發(fā)展研究生教育。（保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議）研究生簽名：時間：雕年《月）日了指導教師簽名：；時間

5、；年４月。日遣＾＾摘要摘要醋型兒茶素是簡單兒茶素Ｃ環(huán)３位経基沒食子弼基化的產物。己有資料表明：植物體內代謝物質的酷基化是在活性醜基供體的參與下完成的。目前在植物機體內發(fā)現(xiàn)有很多種活性爾基供體，能夠催化物質的醜基化，如酷基硫醋化合物（ＣｏＡｔｈｉｏｅｓｔｅｒｓ）、－－５－０５０咖啡醜奎尼酸（ｃａｆｅｏｙｌｑｕｉｎａｔｅ）、沒食子醜基葡萄糖（１－－－Ｄ－ｃｏｓｅ０ｇａｌｌｏｙｋ３ｇｌｕ）。（－－－－－－表兒茶素沒食子醜基轉移酶（ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｉＫｌＯｇａｌｌｏｙｌ

6、ｐＤｇｌｕｃｏｓｅ－ＯｇａｌｌｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＥＣＧＴ）能夠在植物體外催化簡單兒茶素合成醋型兒茶素。但在茶樹（Ｃａ／ｗｅ化地任Ｑ底《似ｚｅ）中，證明該反應存在的證據(jù)還不清楚。茶樹（Ｃｃｗｗｅ航ｔ’ｗｎｅ／ｗｂ件中存在醋型兒茶素的水解酶。合成與水解反應的同時進行，很難判斷ＥＣＧＴ就是茶樹體內醋型兒茶素合成的關鍵酶。本研究通過ＣｓＥＣＧＴ的原核表達、ＣｓＥＣＧＴ序列分析、過表達載體的構建、ＥＣＧＴ的表達與提取、ＥＣＧＴ的功能驗證等實驗，獲得了如下結果：－ＥＴ－１ＣｓＥＣＧＴ原：Ｅ

7、Ｔ２８ＥＣＧＴ／３２ＥＣＧＴ重組大廝．成功構建了兩個核表達系統(tǒng)Ｐｐ一－桿菌。經過系列的優(yōu)化表達條件的探索，包括ＳＤＳＰＡＧＥ蛋白檢測、酶純化手段、生物轉化、高效ＨＰＬＣ，都沒有得到顯著的實驗結果。一２．分析了ＣｓＥＣＧＴ的基因序列４４３；全長為１７２６ｂｐ，其包含個完整的編碼區(qū)１ｂｐ，’５非翻譯區(qū)（ＵＴＲ）７２ｂｐ，３啡翻譯區(qū)１８０ｂｐ和ｐｏｌｙＡ尾己３１ｂｐ，編碼區(qū)ＧＣ含量為５１．８３％４８０個（ｓｔ，編碼氨基酸組成的蛋白表兒茶素沒食子酷基轉移酶）。通過ｂｌａ軟件在線比較

8、分析，發(fā)現(xiàn)ＣｓＥＣＧＴ編碼的氨基酸序列與其它物種的絲氨酸酷基轉移酶一（Ｓｅｒｉｎｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）具有較高的致化尤其與來玉米Ｚｅａｗｆｌ、潘那利番茄（［燦’Ｃ■腑）、蝶豆化ｏｎａｔｅｒｍｓ化ａ的絲氨酸敵基轉移酶的相似性達４０％Ｗ上。（）３－－．成功構建了ＥＣＧＴ過表運載體ＣＸＳＮＥＣＧＴ、對照空載ＣＤＧＣＣＤＢｐ體ｐ，并將其轉入到農桿