高效液相色譜熒光檢測法同時測定

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1、第38卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡報第3期2010年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry429～433DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00429高效液相色譜-熒光檢測法同時測定蔬菜中3種磺胺類藥物殘留1，211222*1李學(xué)德鮮啟明劉紅玲花日茂許珊珊陳海燕于紅霞1(南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院，污染控制與資源化研究國家重點實驗室，南京210093)2(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，安徽省農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室，合肥230036)摘要建立了蔬菜中3種磺胺類藥物(SAs)的高效液相色譜-

2、熒光檢測法。蔬菜樣品用甲醇提取3次，將提取液濃縮干，用0.1mol/LHCl溶解殘渣，經(jīng)熒光胺衍生化后，用反相柱(ODS)分離，以乙腈和0.5%醋酸為流動相進行梯度洗脫，用熒光檢測器檢測。3種SAs的檢出限(LOD)為1.02～1.29μg/g，方法的定量限(LOQ)為3.4～4.3ng/g(鮮重)。蔬菜樣品中SAs的添加濃度在0.2～1.0ng/g范圍內(nèi)，3種SAs的平均回收率均大于87%，日內(nèi)與日間RSD均小于10%。實際蔬菜樣品測定結(jié)果表明，3種SAs在不同蔬菜中均有不同程度檢出，總含量為0.0726～0.3709μg/g(鮮重)。關(guān)

3、鍵詞蔬菜;磺胺類藥物;高效液相色譜熒光檢測;測定方法1引言磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)因其抗菌譜廣、抗菌作用較強且價廉易得，廣泛應(yīng)用于畜牧及水產(chǎn)［1，2］［3，4］養(yǎng)殖動物的疾病防治。同時，人類醫(yī)療也大量使用SAs。據(jù)報道，動物使用抗生素后，有40%～90%抗生素以母體藥物和代謝物的形式隨糞尿排出體外，SAs可以在畜禽糞尿中長期存在，并通過多種途徑進入環(huán)境而造成環(huán)境污染。尤其是隨著動物糞肥的農(nóng)用，越來越多的抗生素進入農(nóng)田土壤。［5］Burkhardt等估計，每年進入農(nóng)田土壤的磺胺類藥物約幾十～幾百克/公頃。珠三角地區(qū)菜地土

4、壤中［6］［7］SAs總含量為53.68～155.24μg/kg。SAs可以被農(nóng)作物吸收蓄積，威脅農(nóng)產(chǎn)品安全，最終通過食物鏈影響人體健康。長期攝入SAs不僅會導(dǎo)致人體內(nèi)的細菌產(chǎn)生抗藥性，而且可以影響泌尿和免疫系［8］統(tǒng)，破壞肌肉、腎臟和甲狀腺等組織，甚至誘發(fā)甲狀腺癌。目前，人們只重視動物性食品(肉、蛋、奶［9，10］等)中SAs的殘留檢測分析，國際食品法典委員會(CAC)和許多國家都規(guī)定了食品中SAs的最大［11］殘留限量(MRL)，而對蔬菜等植物性食品中SAs的污染問題尚未引起重視。由于環(huán)境樣品中磺胺類含量通常很低，現(xiàn)有的分析方法大多通過

5、提取、液液分配、再經(jīng)固相萃取(SPE)富集凈化后利用HPLC［6，12，13］分析，測定過程較煩瑣。本研究建立了HPLC法同時測定蔬菜中3種SAs的方法，樣品經(jīng)提取、濃縮后，通過柱前衍生化后分離測定，省去了凈化過程，方法靈敏、快速、高效、經(jīng)濟。2實驗部分2.1儀器與試劑1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，配熒光檢測器;EYELAN-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司);L-530離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司);SHA-C水浴恒溫震蕩器(江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠);KQ-5200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公

6、司);N-EVAP112氮吹儀(美國Organomation公司);勻漿儀(美國Omni公司);pHS-25酸度計(上海雷磁儀器廠)?；前粪奏?Sulfadiazine，SDZ)、磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine，SM2)和磺胺甲唑(Sulfamethox-azole，SMZ)的純度≥99%(Sigma公司)。熒光胺(Fluorescamine，AlfaAesar公司)，甲醇、乙腈和丙酮均為HPLC級(TEDIA公司)。乙酸為優(yōu)級純，其它試劑均為分析純。實驗用水為超純水。2009-07-12收稿;2009-11-20接受本文系

7、安徽省科技廳重點實驗室項目資助*E-mail:yuhx@nju.edu.cn430分析化學(xué)第38卷2.2樣品制備干(鮮)樣制備:將蔬菜樣品置于烘箱中(<50℃)烘24h，磨碎后備測(勻漿成糊狀后備測)。準(zhǔn)確稱取5.00g勻漿后的鮮樣(干樣0.50g)于50mL離心管中，加入25mL甲醇，15g無水Na2SO4(干樣不加)，擰緊蓋子，置于振蕩器上提取30min，4000r/min離心5min，將上清液過濾到濃縮瓶中(濾紙先用少量甲醇淋洗)。離心管中剩下的殘渣再用甲醇重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干(45℃)，再用N2吹

8、干。2.3實驗方法將3種SAs貯備液分別用0.1mol/LHCl配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取0.5mL濾液于2mL樣品瓶中，加0.6mol/L乙酸鈉緩沖溶液(用1mol/L