p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析

p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析

ID:38262656

大?。?23.41 KB

頁(yè)數(shù):6頁(yè)

時(shí)間:2019-05-25

p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析_第1頁(yè)
p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析_第2頁(yè)
p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析_第3頁(yè)
p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析_第4頁(yè)
p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析_第5頁(yè)
資源描述:

《p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、生物技術(shù)通報(bào)·研究報(bào)告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2010年第7期p53基因表達(dá)沉默的穩(wěn)定Vero細(xì)胞系的建立及特性分析劉超邱亞峰沈陽劉慶偉馬志永(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所獸醫(yī)公共衛(wèi)生研究室,上海200241)摘要:利用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù),建立穩(wěn)定沉默p53基因的Vero細(xì)胞模型。設(shè)計(jì)針對(duì)p53基因的shRNA序列,構(gòu)建p53shRNA慢病毒載體并感染Vero細(xì)胞;嘌呤霉素篩選陽性細(xì)胞,局部消化法挑選細(xì)胞克隆;利用RT-PCR和West-ernblot檢測(cè)p53的表達(dá)水平;利用蟲熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),分析p53的轉(zhuǎn)錄激

2、活功能。RT-PCR和Westernblot結(jié)果顯示,慢病毒介導(dǎo)的shRNA有效地沉默p53基因表達(dá);與對(duì)照組細(xì)胞相比,干擾組細(xì)胞的p53的轉(zhuǎn)錄激活功能明顯降低。慢病毒介導(dǎo)的shRNA高效、穩(wěn)定地沉默了p53基因的表達(dá),同時(shí),有效地降低了p53的轉(zhuǎn)錄激活功能,為研究p53的生物學(xué)功能提供了有利的工具。關(guān)鍵詞:p53慢病毒載體RNA干擾篩選細(xì)胞系GenerationandCharacteristicAnalysisofaStableVeroCellLinewithp53GeneExpressionKnocked-downUsingLentivi

3、ralVector-mediatedShortHairpinRNALiuChaoQiuYafengShenYangLiuQingweiMaZhiyong(LaboratoryofVeterinaryPublicHealth,ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Shanghai200241)Abstract:ThestudywastoestablishastableVerocelllinewithp53genesilencingusin

4、glentivirus-mediatedRNAinterference(RNAi).VerocellswereinfectedwitharecombinantlentivirusexpressingaspecificshRNAforp53gene.ThepositivecellcloneswereselectedusingselectivedrugofPuromycin,andisolatedusingthemethodofpartialdigestion.Theexpressionofp53wasdetectedbysemi-quantit

5、ativeRT-PCRandWesternblot.Thep53transcriptionactivityofthenegativecontrolandp53RNAiVerocellswasana-lyzedwithaluciferasereportsystem.TheVerocelllinewithp53genesilencingwasobtained.Theanalysisofsemi-quantitativeRT-PCRandWesternblotshowedthattheexpressionofp53wassubstantiallyd

6、own-regulatedbyRNAi.Thep53transcriptionalactivityinRNAicellswassignificantlydecreasedcomparedwiththatinnegativecontrolcells.Theresultsdemonstratedthatthelentiviralvector-media-tedshorthairpinRNAhaseffectivelyandspecificallysilencedp53geneexpressionandconsequentlydown-regula

7、tedthep53transcrip-tionalactivityinthegenerated-p53RNAiVerocellline.ThisRNAicelllinewasappearedtobeausefultoolinstudyingthebiologicalfunctionofp53.Keywords:p53LentivirusvectorRNAinterfereScreeningCellline[2]在各種動(dòng)物細(xì)胞中,p53基因具有非常相似的路非常復(fù)雜,具有參與細(xì)胞周期調(diào)控,細(xì)胞分化[3][4]基因結(jié)構(gòu),長(zhǎng)約20kb,都由11個(gè)外顯

8、子和10個(gè)內(nèi)與衰老,DNA修復(fù)與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種生物[1]含子組成。而p53蛋白在細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通學(xué)功能。收稿日期:2010-03-15基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁(yè),下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁(yè),下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學(xué)公式或PPT動(dòng)畫的文件,查看預(yù)覽時(shí)可能會(huì)顯示錯(cuò)亂或異常,文件下載后無此問題,請(qǐng)放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權(quán)歸屬用戶,天天文庫(kù)負(fù)責(zé)整理代發(fā)布。如果您對(duì)本文檔版權(quán)有爭(zhēng)議請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系客服。
3. 下載前請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔內(nèi)容,確認(rèn)文檔內(nèi)容符合您的需求后進(jìn)行下載,若出現(xiàn)內(nèi)容與標(biāo)題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時(shí)可能由于網(wǎng)絡(luò)波動(dòng)等原因無法下載或下載錯(cuò)誤,付費(fèi)完成后未能成功下載的用戶請(qǐng)聯(lián)系客服處理。