里氏木霉纖維素酶突變株選育的研究

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1、研究報告里氏木霉纖維素酶突變株選育的研究烏卜敏辰李劍芳復(fù)旦大學(xué)生物化學(xué)來無錫輕工大學(xué)食品學(xué)院一,‘〕,摘要以里氏木霉為出發(fā)菌株經(jīng)紫外和亞料的固態(tài)發(fā)酵法其濾紙酶活和卜葡萄糖昔,硝基孤誘變處理后得到一株抗纖維二糖阻遏突變株,酶活分別為和葡萄糖一。一突變株的纖維素濾紙酶活提高了是一株很有應(yīng)用價值的纖維素酶工業(yè)化生產(chǎn),,一經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化后采用固體發(fā)醉。一,菌本文報導(dǎo)了以為出發(fā)菌株用篩選菌株發(fā)酵培養(yǎng)溫度,其濾紙酶活和卜葡萄?？菇到馕镒瓒敉蛔冎攴ㄟx育纖維素酶高產(chǎn)菌糖昔酶活分別為和葡萄糖。一種關(guān)銳詞里氏木霉突變株纖維素酶材料和方法固體發(fā)酵

2、育種菌株引言本研究所用的出發(fā)菌株為里氏木霉一。目前纖維素酶的酶解效率,由無錫輕工大學(xué)中央不高遠遠比不。,,研究所酶工程實驗室提供上淀粉酶因此影響纖了維素酶的工業(yè)化生產(chǎn)和廣泛應(yīng)用。要使纖維素得以充分分解和利原料及儀器、,一,,分析試劑無水葡萄糖二硝基水楊用就酶本身而言主要考慮兩個方面一方酸、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、苯酚、醋酸鈉、冰面是提高酶的活力另一方面由于纖維素酶是’·,、、〔幻醋酸無水亞硫酸鈉水楊素降解纖維素生成葡葡糖的一組酶改善纖維及新華濾紙。,中素酶系各組分的相對含量可充分發(fā)揮它們之國杭州新華造紙廠間的協(xié)同作用。發(fā)酵原料稻

3、草稈或小麥稈和鼓皮粉碎、。近年來,通過大量的誘變育種工作后過目篩硫酸按等及發(fā)酵,,、、條件的優(yōu)化纖維素酶活力不斷提高出現(xiàn)許儀器恒溫培養(yǎng)箱高壓滅菌鍋超凈工,一‘,、、、〔〕多產(chǎn)酶活力高的菌株纖維素水解產(chǎn)物對作臺型分光光度計恒溫水浴鍋分析天,、一、。酶有抑制作用其中纖維二糖是抑制纖維素酶平酸度計具塞試管等水解作用的主要產(chǎn)物抑制劑。許多研究者在改培養(yǎng)基進纖維素酶系組成方面作了大量工作以提高件平皿粗篩培養(yǎng)基母液、微晶葡萄糖昔酶,有人采用不同菌株的液態(tài)纖維素,纖維二糖一,微量元素液,瓊活性,,,混合發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)纖維素酶改進了纖維素酶脂自

4、然加入脫氧膽酸鈉抑制木霉菌的’〕,,。系組成,或在木霉纖維素酶中補加曲酶的民擴散生長便于菌落分離其中’母液葡萄糖昔酶,極大地提高了纖維素酶的降解能磷酸,檸檬酸鈉,硝酸鈉二氫鉀,。。,,,力〕二水氯化鈣一七水硫酸鎂用我們應(yīng)用常規(guī)篩選方法得到了一株具有高蒸餾水定容至。一,,纖維素酶活的里氏木霉菌株其具有與微量元素液濃度鹽酸硫酸亞,,,,國內(nèi)外木霉優(yōu)良菌株相近的產(chǎn)纖維素酶能力鐵氯化鋅一水硫酸錳鮑六水,,。各葡萄昔酶活性較高采用以纖維素為主要原氯化鉆鮑用蒸餾水定容至里氏木霉纖維素酶突變株選育的研究烏磚敏辰李劍芳—,,斜面培養(yǎng)基醋酸纖維

5、素鈉硫酸錢濾紙酶活力定義以濾紙為底物在反應(yīng),酵母膏,瓊脂,自然。條件℃,,,恒溫下,以水解反,固體發(fā)酵培養(yǎng)基稻草稈或小麥稈鮑數(shù)應(yīng)中每催化纖維素水解形成葡萄,,,。。皮硫酸錢加水自然糖的酶量為一個單位,誘變方法葡萄糖昔酶活力定義以水楊素為底物在單抱子懸浮液的制備取剛成熟的新鮮抱,,,以反應(yīng)條件℃恒溫下子于盛有玻璃珠和醋酸緩沖液的三角水解反應(yīng)中每催化水楊素水解形成,,,瓶中振蕩用無菌脫脂棉過濾濾液用葡萄糖的酶量為一個單位。血球計數(shù)板計數(shù)后,調(diào)整抱子數(shù)為護個,酶活計算公式為備用。酶活單位紫外誘變?nèi)伪ё討腋∫河跓o菌平,,式中一由標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線查得的葡萄毫克數(shù)皿中于紫外燈下處照射一稀釋倍數(shù)一酶液毫升數(shù)取致死率”以,上的涂布于粗篩平皿挑取形一恒溫時間成清晰透明圈的菌株復(fù)篩。結(jié)果與討論亞硝基肌誘變用分析天平稱取固體一,,菌株選育圖譜加丙酮溶解后再加無菌一,,以此為母液配制不本研究以里氏木霉出發(fā)菌株采醋酸緩沖液,,用紫外和處理獲得了一株抗纖維二糖同濃度的溶液于支試管中各加入一,。,突變株其選育圖譜見圖單抱子懸液再分別加入,,溶液各搖勻℃靜置大量稀釋終止一葡萄糖反應(yīng),測定各劑量的致死率,選致死率左去一右的涂布于粗篩平皿。葡萄糖··‘’告晦液制備及酶活力瀏定方法一葡萄糖濾

7、紙酶活力測定告于具塞試管和中加緩沖液一葡萄糖,火,℃分別加入濾紙片一張一圖里氏木霉突變株選育圖譜預(yù)熱一后在管中加入適一當(dāng)濃度使測定吸光度在之間的酶紫外誘變結(jié)果一液,℃保溫,取將的單抱子懸液在紫外燈出各加試,,,下處照射的抱子懸液涂布于含齊管中補加酶液煮沸冷卻。,纖維二糖的粗篩平板挑取能形成明顯透明后加水搖勻處測定光密度管為,。,圈的菌株復(fù)篩結(jié)果見表其中號菌株產(chǎn)空白對照并從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的,比一,葡萄糖含量折算成酶單位葡萄糖或酶較高出發(fā)株高作為再次,一。。誘變的出發(fā)株編號一各葡萄糖普酶活力測定誘變結(jié)果于具塞試管中加入水

8、楊素溶液將處理量為處理時間‘,,一的單抱子懸液涂布于含預(yù)熱一后加入纖維,適當(dāng)濃度使測定吸光度在之間的二糖的粗篩平板挑取約個菌落進行復(fù),,。,。酶液℃保溫其它同篩結(jié)果見表其中號菌株產(chǎn)酶較高提,一。酶活力單位定義與計算高編號中國釀造年第期,。一特點這對工業(yè)化生產(chǎn)是有利的表紫外誘變