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1、76廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)·2008年第10期番木瓜果實總RNA提取方法比較袁貞，沈文濤，周鵬(中國熱帶科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所，海南海El571101)摘要：通過吸光比值分析和非變性膠電泳，對番木瓜果實RNA不同提取方法進(jìn)行了比較研究，結(jié)果表明．Trizol試劑法提取番木瓜果實RNA的OD260／OD230值在1．63～1．97、OD260／OD280值在1．79—2．00之間，具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影響較少以及無DNA和蛋白質(zhì)污染等優(yōu)點，對類似番木瓜果實成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鑒意義。關(guān)鍵詞：番木瓜果實：RNA；提取中圈分類號：T667．9；TQ91文
2、獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1004—874X(2008)10—0076—04ComparisonoftotalRNAcontentofpapayabydiferentmethodsYUANZhen，SHENWen-tao，ZHOUPeng(／nst／tuteofTropicalBioscieneeandBiotechnologyChineseAcademyofTropicalAgricuhure，H~kou571101，Ch／na)Abstract：ThisarticledeterminedandComparisonoftotalRNAcontentofpapayabyTri
3、ZOlanddifierenttraditionalmethods，analysebyabsorbencyandgelelectrophoresis．ResultsindicatethatthevalueofRNA0D260／OD23Owerebetween1．63to1．97andthevaluesofOD260／OD280werebetween1．79to2．00．TheectrophoresisbandswereclearonagarosegelandintegrityofRNAwasgood．RNAwithhighqualityandhighquanitycanb
4、eextractedwiththismethodforobtainingsimilaritypapayaplants也highconcentrationsofphenolics．Keywords：papayafruit；RNA；extraction番木瓜(Caricapapaya)又稱為木瓜、萬壽瓜．屬番CTAB(十六烷基三乙基溴化銨)法等。這些方法已在許木瓜科多年生草本植物，是熱帶、亞熱帶果樹之一。番多植物組織中應(yīng)用并成功提取RNA。但是，有些植物木瓜鮮果具有豐富營養(yǎng)和食療保健價值。其果實中含組織所含的物質(zhì)種類極為復(fù)雜，尤其在某些果實中含有豐富的糖分、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、脂
5、肪、多種維生素及有豐富的多糖以及一些尚未能確定的次生代謝產(chǎn)物．可溶性鈣、鐵等營養(yǎng)成分，并有健脾胃、助消化、通便、這些物質(zhì)的存在常常會影響RNA提取的產(chǎn)量和純度。清署解渴、解酒毒釋血壓、解毒消腫、通乳、驅(qū)蟲等功所以人們針對不同的研究對象發(fā)展了一系列相對有效效。據(jù)美國營養(yǎng)學(xué)對水果果實內(nèi)維生素、礦物質(zhì)、纖維的RNA提取方法，而至今尚未見有關(guān)高質(zhì)量番木瓜果素含量和熱量的評估表明，番木瓜位居1O種最佳水肉組織總RNA提取的報道。為此。我們通過吸光比值果的首位【l1。因此，開展番木瓜果實的分子生物學(xué)研究分析和非變性膠電泳，對番木瓜果實RNA不同提取方可以對其品質(zhì)改良和遺傳育種等方面有
6、著重要的作法進(jìn)行了比較研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。用。1材料與方法從果實中提取RNA是進(jìn)行分子生物學(xué)研究的必要前提。在進(jìn)行Northern雜交分析、純化mRNA以用1．1試驗材料于體外翻譯或建立eDNA文庫、RT—PCR及差示分析供試的番木瓜品種為梭羅2號。取果皮綠色或黃等分子生物學(xué)研究時，都需要高質(zhì)量的RNA。因此，從色的果實，去皮后將果肉切成約1cm，大小的小塊，并番木瓜果實中提取純度高、完整性好的RNA是順利用液氮速凍處理，防止果肉被空氣氧化和RNAase污進(jìn)行其分子生物學(xué)研究的關(guān)鍵。目前，有關(guān)植物組織染。RNA的提取方法很多，最常用的有胍法、苯酚法和試驗使用的塑料
7、制品均用0．1％DEPC水溶液浸收稿日期：20o8—06_ol泡8h以上并經(jīng)高溫高壓滅菌，玻璃或金屬制品用作者簡介：袁貞(1982一)，女，在讀碩士生200~C高溫烘烤8h以上，其他儀器設(shè)備或試劑均保證通訊作者：~m(1963一)，男，研究員，E-mail：zhp6301@126．corn干凈且無RNAase污染771．2RNA提取方法組織約200mg于離心管中，加入提取緩沖液lmL(5試驗設(shè)Tris一硼酸法、異硫氰酸胍法、PEG一異硫氰moYL異硫氰酸胍、pH8．0。50retool／L1rris—HC1、pH酸胍法、改良C
